Western Blot转膜不充分的原因

科研实验

(1)膜没有完全均匀湿透

使用100% methanol浸透膜。

(2)靶蛋白分子量小于10 000

选择小孔径的膜，缩短转移时间。

(3)靶蛋白[color=var(--weui-LINK)][url=]等电点[/url]等于或接近转移缓冲液pH值

可尝试使用其他缓冲液如CAPS缓冲液（pH 10.5)或使用低pH值缓冲液如乙酸缓冲液。

(4)甲醇浓度过高

过高甲醇浓度会导至蛋白质与SDS分离，从而沉淀在凝胶中，同时会使凝胶收缩或变硬，从而抑制高分子量蛋白的转移。降低甲醇浓度或者使用乙醇或[color=var(--weui-LINK)][url=]异丙醇[/url]代替。

(5)转移时间不够

对于厚的胶以及高分子量蛋白需要延长转移时间。