ALP酶标AFP抗体稀释液稳定性差有什么保护剂？

mango524

A：请教个问题，ALP酶标AFP抗体稀释液稳定性差有什么保护剂推荐吗？

B：蛋白浓度太低了？
C：优化过什么条件？
A：增加了BSA浓度  加了海藻糖
B：不能只用BSA
A：加过一些表活  稳定性都不是很好，有什么关键的保护剂吗？
D：稳定性有多不好？
C：37度7天下降30%
A：表活并不能很好的改善稳定性，相反还会带来很多负面的影响；此外37°稳定性没有任何意义
C：要看4度的稳定性吗 ？
B：看保存条件下的稳定性数据。
A：就是4度保存  没办法做很长时间  就考虑热加速了
B：稳定性不需要看很久，不稳定的东西在配制1周到3个月内一定会表现出来的，通常1-4周就可以看到非常明显的趋势了；做处方稳定性评价的关键是建立固定的评价标准，筛选到对波动敏感的评价样本；37°稳定的处方不代表可以在保存条件下也稳定；
B：怎么很多AP标记物不稳定呢？你目前稀释液有哪些组分？
A：Tris BSA 半乳糖 镁离子 锌离子 PEG，
C：37度可以作一定参考，不能全信，关键是它是一个酶，不知道适合不适合做加速稳定性
B：做稳定性研究有几个点要注意，首先是关键性原材料，例如你这里说的抗体的浓度不能太低，至少要与供应商给出的抗体使用浓度在相同的数量级上；有些生产商为了经济效益赚原材料使用滴度，把抗体或抗原使用浓度放得很低，表面上短时间内问题不大，但长期隐患非常可怕；
     其次，保护性蛋白不建议使用一种，而且要做蛋白梯度试验评估，我个人认为足够的蛋白量比所谓的保护剂效果更好，小分子蛋白比大分子要好；
     碱性磷酸酶的作用是促使发光剂发光且稳定发光，并没有什么特殊的作用，也不参与与目标待测物的反应；实际上与传统EIA反应中的辣根过氧化物酶的作用是一样的；
C：那要催化底物吧
B：这个促底物是因为有相应的化学基团，不是因为酶具有活性
B：AMPPD为1，2-二氧环已烷衍生物，在它的分子结构中有两个重要部分，一个是联接苯环和金刚烷的二氧四节环，它可以断裂并发射光子；另一个是磷酸根基团，它维持着整个分子结构的稳定。在通常情况下，这种化合物很稳定。但是，如果有碱性磷酸酶存在，这个酶就会催化AMPPD脱去磷酸根基团，形成一个不稳定的中间体。这个中间体随即自行分解（二氧四节环断裂），同时发射光子。这是酶促发光，这个酶的作用是催化剂，不参与反应本身；而试剂的不稳定是由于标记的抗体在处方溶液中由于抗体浓度的改变形成了新的物理状态的时候对反应位点的遮盖、折叠等情况在初始配制和久置一段时间后出现了不同，使得能够提供反应位点的抗体产生了变化。