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[技术] 动物模型 | 大鼠原位肾移植模型的建立

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发表于 2022-12-6 09:35 | 显示全部楼层 |阅读模式

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肾移植是目前尿毒症患者的首选治疗手段。由于临床试验的诸多限制性,因而建立合适的肾移植动物模型对肾移植相关基础及应用研究具有重要的应用价值。
动物的选择
大鼠是目前进行肾移植基础实验研究的重要动物。
造模方法
由于大鼠肾静脉壁薄脆弱及输尿管纤细迂曲的特点,在动物模型构建的过程中静脉吻合和尿路重建往往成为重点、难点所在,时常制约和影响整个实验进程。通过不断摸索及技术改进,目前采用动脉端端吻合、静脉端端吻合和输尿管端端吻合法建立一种稳定、可靠的大鼠肾移植模型。

试验动物
无特定病原体(SPF)级Wistar雄性大鼠,体重250~300g。供受鼠均为Wistar大鼠。

模型的建立方法
1
供肾切取
1%戊巴比妥钠10ml/kg腹腔注射麻醉大鼠,备皮消毒,仰卧位取腹正中切口,沿腹中线从剑突下至耻骨联合上剪开皮肤及肌肉进入腹腔,勿伤及肠道。打开后腹膜,滴注2%的利多卡因约1ml于血管,保持血管湿润的同时还可以减轻血管游离过程中的痉挛现象。显微镊游离输尿管,注意保留伴行血管,游离至肾下极2cm处斜行剪断输尿管。游离肾脏至近肾门处,保留少量肾周脂肪组织以便牵拉肾脏。自近端向远端游离肾动脉及肾静脉至近肾门,8-0显微缝线结扎肾静脉分支,如性腺血管、肾上腺动静脉。处理肾动静脉时,仔细操作,注意变异小分支的存在,并同样分离结扎或电刀电灼止血。
肾动脉、肾静脉、下腔静脉及腹主动脉游离充分后,取1ml 肝素生理盐水(100 U/ml)于阴茎背静脉注射,全身肝素化受鼠。于左肾动脉与右肾动脉间腹主动脉下方穿过6-0丝线一根,打好空的外科结、暂不收紧。腹主动脉分叉处上方以同样的方法置空结线一根,并以血管夹于此线下方阻断腹主动脉,收紧最上方的外科结,紧贴下腔静脉剪断左肾静脉。于血管夹阻断水平以上的腹主动脉以28G留置针穿刺,收紧预置的6-0空结线,固定针头。
缓慢匀速注入4℃肝素生理盐水,可见肾静脉端口流出血性液体,持续注入灌注液至静脉端流出液为无色,肾脏颜色苍白为止,总量约5ml。近腹主动脉离断肾动脉,取下肾脏,放入已预置冰上的肝素生理盐水中。
2
供肾移植
同供鼠操作,暴露受鼠游离肾脏,结扎肾上腺、性腺血管等分支,游离左肾动脉、肾静脉,于肾门下约1cm处结扎并斜行剪断输尿管。近腹主动脉及下腔静脉,以动脉夹阻断肾动脉、肾静脉,近肾门剪断肾动、静脉,移除受体左肾。用肝素生理盐水冲洗近端残端,尽量冲出残留血液,修剪断面。用纱布自制带洞肾袋,置入供肾,使肾动脉、静脉和输尿管经洞口暴露于肾袋外,肾袋表面撒少量冰水,以保持肾脏低温。
首先吻合位于背面的肾动脉,采用11-0带针缝线两定点法行间断吻合。首先于肾动脉上方和下方缝合两针,分别用血管夹固定作牵引。先缝合前壁,在前壁正中缝合一针,暂不打结。在中点针与上、下定点的中点处各缝合一针,均暂不打结,待3针均结束以后依次打结。翻转固定线,使后壁朝前,同法缝合后壁,完成后剪断固定线,动脉共计吻合8针(含两定点)。
肾静脉也采用两定点法,11-0带针缝线连续缝合。先缝合后壁,缝完后壁后与相连固定线打结,无需翻转固定线,继续缝合前壁。前后壁各缝合7针左右,缝合完成后剪断固定线。
经阴茎背静脉注入含80kU青霉素钠的温生理盐水约3ml补充血容量,使用血管夹分别阻断吻合口远端的肾动脉及肾静脉,开放吻合口近端血管夹,观察血管通畅与否,是否有明显渗漏。一般而言,开放血管后初期可见吻合口少量渗血,采用棉签轻轻压迫1分钟后即可止血。如出血明显难以止住,则可谨慎进行补缝。血管吻合通畅后剪开肾袋,开放肾门处血管夹,观察肾脏灌注后颜色与质地,输尿管口有无尿液流出。如吻合口通畅,30秒内可见肾脏迅速变红,质地变硬,动脉搏动良好,静脉充盈。
继续观察输尿管口5分钟左右,见尿液流出后行输尿管端端吻合。采用11-0带针缝合线,斜行贴合两输尿管残端,分别于4点间断缝合输尿管。
最后切除右侧肾脏,检查腹腔有无活动性出血,温生理盐水冲洗腹腔,以利于受鼠复温。使用3-0带针缝合线缝合肌肉、皮肤,手术结束。

结果
一般认为,大鼠失去双侧肾脏24小时内将死亡,因此,选择术后3天为界限,判断肾移植是否成功。

来源:实用器官移植电子杂志,2014

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