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[技术] 病理染色、蛋白条带别慌张,MDL帮你一起解决那些常见的小困惑

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发表于 2022-10-12 14:23 | 显示全部楼层 |阅读模式

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近来,病理和蛋白粉丝呼声较高,今天小助手又总结了一期关于病理、蛋白的实验问题,帮助大家有效解决那些在实验中遇到的小困惑。
做完病理如何看病变区别?
阅片分析看组织结构的变化、细胞结构的变化。
怎么判定结果好坏?

通过阅片分析,病理变化符合实验目的的结果即为满意。
组化实验的注意事项?
1)烤片要充分
2)脱蜡要彻底
3)修复要到位
4)抗体尽量选择效果好的,抗体稀释比例要合理
原位杂交需要注意什么?
1)所有试剂都要用灭菌的DEPC·H₂O配
2)配试剂用到的量筒需要180℃烘6小时
3)加探针后一定要放在65度48小时
4)原位杂交第二天,不再需要用DEPC·H₂O配制试剂
病理染色分为哪几个,各过程有什么区别?
HE、免疫组化、TTC染色、masson染色、鬼笔环肽染色。

为什么病理报告要等那么久?
1)首先要取材,20只小鼠大概需要6-8小时
2)根据组织固定,如果组织比较小的话固定液充分至少需要12小时
3)软软的组织是不利于切片的,需要脱水大约需要18个小时
4)之后包埋,制作成蜡块,然后才是我们熟悉的切片,将蜡块切成4微米左右的组织白片,进行脱腊水化
5)之后进行染色才能在显微镜底下观看,如果是HE染色一架切片30张染色过程大约需要45分钟
6)免疫组化的话,大约需要两天,染色完成后还需要拍片观察。
7)最后才是技术人员签字,这样完整的病理报告就诞生了。
条带上出现不均匀的白色斑点时,是什么原因?如何解决?
原因:转膜时有气泡,或膜上抗体分布不均匀
解决办法:转膜前小心去除气泡,抗体孵育时保持摇动
21kd蛋白显出来雾蒙蒙一片,maker都看不到怎么办?
控制好电泳温度(4℃),浓缩胶电泳阶段延长时长,分离胶电泳时间缩短。
跑出来的分子量比说明书的分子量小三十左右是为什么?
可能是同一基因不同的剪接mRNA的翻译产物;也可能是目的蛋白有前体和成熟体,二者相差大约30Kd;
有些蛋白表达量很低,用30ug根本测不出来怎么办?
加大上样量,但是杂带会比较多,可以做个富集试试
这一期的实验问题就到这里啦,如果您还有其他在实验当中遇到的问题,请扫描下方二维码添加“MDL科研助手”的微信,私信小助手,小助手会帮您一起搞定实验。

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