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[相关标准] 重组肠激酶和目的蛋白分离纯化方法

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发表于 2022-5-7 11:59 | 显示全部楼层 |阅读模式

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重组肠激酶专为切割重组表达融合蛋白设计,分为两个类型:rEK-B 和rEK-H ,分别为不含有His-6和含有His-6 重组标签。
       雅心生物目前生产的为rEK-B.不含His标签,相对比活高,约为20000 Unit/mg pro,按照活性定义,1 Unit 可以切割0.5mg目的蛋白,则酶切液中的重组肠激酶相对于目的蛋白的含量为万分之一(0.01%)。所以,在进一步的实验中,可以不考虑其对下游实验的影响,建议可以不纯化。
       如果确实需要去除rEK,建议的去除方法如下:
       如果使用亲和层析,可以利用胰蛋白酶抑制剂亲和胶,由于肠激酶是一种丝氨酸蛋白酶,胰蛋白酶抑制剂可以与肠激酶结合,从而达到纯化目的。建议利用离子交换层析分离去除微量的肠激酶。
       PH8.0条件下,肠激酶与DEAE胶结合,并且在0.15M NaCl中可以被洗脱。可以利用目的蛋白与肠激酶电荷以及与DEAE胶的结合以及洗脱的不同条件将二者进行分离。

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