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[分享] 重组Kex2蛋白酶反复冻融稳定性实验

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发表于 2022-4-8 13:23 | 显示全部楼层 |阅读模式

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试剂:
供试品:重组Kex2蛋白酶(冻干粉),批号:Re170601   
测活缓冲液:50mM Tris-HCl+2mM CaCl2pH8.0
溶解缓冲液:20mM NaAc-HAc,2mM CaCl2pH 5.2   
仪器设备:
TU-1901双光速紫外可见分光光度计
SW-CJ-1D型单人净化工作台
实验方法:
供试品的配制:取供试品适量,用20mM NaAc-HAc,2mM CaCl2pH 5.2溶解至1mg/ml,取1mg/ml的供试品溶液用20mM NaAc-HAc,2mM CaCl2pH 5.2稀释8X,稀释过程中动作轻柔,避免气泡的产生,所有操作均在超净台中进行。
活性测定:对蛋白进行反复冻融后测定活性,进行3次重复活性测定。  
保存条件:-20℃以下。
实验步骤:
取光程为1cm的带盖石英比色杯,加入25℃预热过的3ml 底物溶液,按“紫外分光光度法操作规程”在405nm的波长处,调零。取供试品溶液10.0μl加入,立即计时并摇匀,在405nm的波长处测定吸光度值,每隔20s读取吸光度,共2min。
总结:
Kex2反复冻融3次之后活性开始有所下降,下降到一定程度之后活性开始稳定。Kex2反复冻融5次之后活性基本稳定,比活符合标准。



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