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[分享] 细胞培养液中如何使用重组胰蛋白酶细胞消化液

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发表于 2022-3-7 14:48 | 显示全部楼层 |阅读模式

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用不同活性的两种细胞消化液消化Hela贴壁细胞,观察消化结果和记录消化时间及转接培养后的生长状态,见表1。
细胞消化液                  时间/min            消化完全细胞/%                生长状态
PBS+1kU                         7                         86                  
PBS+2kU                         6                         80                  
PBS+5kU                        4.5                        50                 不好
PBS+10kU                       3                         42                 不好
PBS+0.01%EDTA+1kU        3                         90                  
PBS+0.01%EDTA+2kU        2                         96                  
PBS+0.01%EDTA+5kU       1.8                        35                 不好
PBS+0.01%EDTA+10kU      1.5                        20                 不好
1 不同细胞消化液的细胞消化时间及消化后和转接培养后的生长状态
由表1可见,第一组细胞消化液是单独使用RPT 消化贴壁细胞,在PBS+1KU和PBS+2KU组的消化时间很慢(6min以上),且由于时间过长,致使细胞损害,细胞传代后不能正常生长;随着RPT活性增加到5kU和10kU,消化时间缩短,但细胞毒性增加,所以RPT不能单独使用。第二种细胞消化液是RPT和EDTA配合使用,消化时间缩短,消化后和转接培养后细胞状态较好。由于EDTA是化学螯合剂,主要螯合Ca2+Mg2+,使细胞分离,细胞毒性小,能帮助RPT消化细胞。根据消化时间,消化后细胞生存能力和转接后生长状态,最终确定活性2KU/ml的PBS+0.01%EDTA细胞消化液最合适,见图1。


a. Hela细胞消化前的形态;b. Hela细胞消化后的形态正常,细胞分离完全(消化时间:2min);c.转接培养24h后的生长状态正常。

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