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[分享] K02-RPT重组胰蛋白酶酶联免疫吸附测定试剂盒 使用说明书(96T)

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发表于 2021-6-17 15:02 | 显示全部楼层 |阅读模式

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重组胰蛋白酶酶联免疫吸附测定试剂盒
使用说明书(96T)


1.试剂盒用途
本试剂盒用于体外定量检测待测样品中重组胰蛋白酶含量。
本试剂盒仅供研究和工业生产使用。
2.试剂盒基本参数
灵敏度:≤ 1 ng/ml

特异性:可检测重组胰蛋白酶,与其它重组大肠菌表达系统
相关蛋白无明显交叉反应。
重复性:板内,板间变异系数均 < 10%。
工作时间:熟练实验人员可在 2.5 小时内完成一次测定。
有效期:6 个月
3.试剂盒组成及保存
未拆封的试剂盒可在 2-8℃保存一周。如果一周以后才使用
试剂盒,请拆开试剂盒按照下表中的条件分别保存各组分。


说明:
1、所有试剂瓶须旋紧瓶盖以防止蒸发和微生物污染。
2、酶标板-20℃可存放 6 个月,2-8℃存放勿超过一周。
上海雅心生物技术有限公司 K02-RPT
4.试验所需自备物品
1. 酶标仪(滤光片主波长 450 nm,参考波长 650nm)
2. 高精度移液器,EP 管及一次性吸头、一次性加样槽
3. 37℃恒温箱,双蒸水或去离子水
4. 洁净无纸屑的吸水纸或干布

5.待测样品注意事项
1.样品收集后若在 1 周内进行检测的可保存于 2-8℃,若不
能及时检测,请按一次使用量分装,冻存于-20℃(1 个月
内检测),或 -80℃(3 个月内检测),避免反复冻融。
2.试剂盒检测范围不等同于样本的浓度范围,如果样品中检
测物浓度高于标准品最高值,请根据实际情况,做适当倍数
稀释后再测。
3.若使用化学裂解液制备的样本或细胞提取液,由于引入某些化学物质会导至 ELISA 测值出现偏差。
6.检测前准备工作
①请提前 20 分钟从冰箱中取出试剂盒平衡至室温,
观察溶液是否有结晶,如果有结晶按提示进行操
作。提前 15 分钟打开酶标仪预热。
②稀释液配制
将浓缩标准品&样品稀释液&HRP-抗体稀释液用双蒸水稀
释(1:25)。
③洗涤液配制
将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。
提示:从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶,属于正常
现象,可用 40℃水浴加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液
(加热温度不要超过 50℃,使用时洗涤液温度应为室温)。
请当日使用。
④标准品配制
将标准品于 1000 转/分离心 1 分钟后,加入标准品&样品稀
释液 1.0 mL 至冻干标准品中,旋紧管盖,静置 10 分钟后上
下温和颠倒数次,待其充分溶解后,用移液器将其轻轻混匀
(浓度为 10 ng/mL), 然后进行倍比稀释(注:不要直接在
反应孔中进行倍比稀释)。建议配制成以下浓度:10、 5、

2.5、 1.25、 0.63、0.312、0.156、0 ng/mL。标
准品&样品稀释液直接作为空白孔 0 ng/mL。
提示:溶解和稀释标准品过程中尽量避免产生气泡。
倍比稀释方法
取 7 只 EP 管,每管加入 500 μL 标准品&样品稀释液,从
10 ng/mL 的标准品工作液中吸取 500 μL 加入含有 500 μL
标准品&样品稀释液的 EP 管中混匀配成 5 ng/mL 的标准品
工作液,按此步骤往后依次吸取混匀。如下图。
标准品稀释图例(以 500 μL 为例)
提示:最后一管直接作为空白孔,不再加入标准品工作液。
⑤HRP 标记抗体工作液配制
实验前请先将抗体管 1000 转/分离心 1 分钟,以避
免管壁及管盖上残留抗体。计算实验所需抗体用量(以
100 μL /孔计算),实际配制时应多配制 100-200 μL 工作液。
使用前
15 分钟,用抗体稀释液将 HRP-标记抗体稀释为工作浓度(抗体:稀释液 = 1250),当日使用。
⑥显色底物(TMB)工作液配制
计算实验所需显色底物用量(以 100 μL /孔计算),实际配
制时应多配制 100-200 μL 显色底物工作液。使用前 15 分钟,
用底物稀释液将 TMB 显色底物稀释为工作浓度(底物:稀
释液 =1:20),避光保存,当日使用。
提示:配制显色底物(TMB)工作液要严格避免污染,如
出现变蓝的现象应重新配制。



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