IVD产品经理系列--实验室运营分类知识文库（10）流式细胞术上篇

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流式细胞概述

小桔灯提供了知识文库的服务，接下来小编就给大家带来精彩的单元式分类精彩内容回顾，今天小编分享的是第10部分10流式细胞法概述。

流 式 细 胞 术

节选《流 式 细 胞 术》

徐琦 副教授

新疆医科大学基础医学院免疫学教研室

流式细胞术（Flow Cytometry, 简称FCM）是一种可以快速、准确、客观，并且同时检测单个微粒（通常是细胞）的多项特性的技术，同时可以对特定群体加以分选。

流式细胞仪是测量染色细胞标记物荧光强度的细胞分析仪，是在单个细胞分析和分选基础上发展起来的对细胞的物理或化学性质（如大小、内部结构、DNA、RNA、蛋白质、抗原等）进行快速测量并可分类收集的高技术。

基础研究

淋巴细胞功能、树突状细胞（DC）研究、造血干细胞研究、细胞周期分析、细胞凋亡分析、凋亡相关蛋白分析、细胞功能研究、多药耐药基因研究（MDR）、肿瘤相关基因表达研究、RNA测定、DNA测定、总蛋白测定、癌基因和抑癌基因表达产物测定、血管内皮细胞研究。

临床研究

淋巴细胞亚群测定、血小板分析、网织红细胞分析、白血病和淋巴瘤免疫分型、HLA-B27分析、PNH诊断、人类同种异体器官移植中应用、细胞因子测定、AIDS诊断与治疗和疗效评价、flow-FISH法测定端粒长度。

一.流式细胞术的发展

二.流式细胞仪工作原理

工作原理

采用激光作为激发光源，保证其具有更好的单色性与激发效率；

利用荧光染料与单克隆抗体技术结合的标记技术，保证检测的灵敏度和特异性；

用计算机系统对流动的单细胞悬液中单个细胞的多个参数信号进行数据处理分析，保证了检测速度与统计分析精确性。

激光光源

单波长、高强度、高稳定性

多采用氩离子激光器或氦氖激光器

一般选配2-4根激光，488nm 、633nm和355nm、407nmUV激光

最多检测13个荧光参数

流式细胞仪的光信号

1）散射光信号

前向角散射光（FSC）入射激光的同向散射光信号细胞相对大小及其表面积。

侧向角散射（SSC）入射激光90°角的散射光信号细胞粒度及细胞内相对复杂性。

2）荧光信号

荧光信号由被检细胞上标记的特异性荧光染料受激发后产生，发射的荧光波长与激发光波长不同。

每种荧光染料会产生特定波长的荧光和颜色，通过波长选择通透性滤片，可将不同波长的散射光和荧光信号区分开，送入不同的光电倍增管。

选择不同的单抗及染料就可同时测定一个细胞上的多个不同特征。

线性放大器和对数放大器。

三.流式细胞仪的数据显示

四.流式细胞仪的质控

五.常见的流式细胞仪及应用领域

1）淋巴细胞及其亚群的分析

T淋巴细胞及其亚群分析

Th(CD3+CD4+CD8-T); Tc(CD3+CD4-CD8+T)

B淋巴细胞及其亚群分

B1(CD19+CD5+):产生IgM型自身抗体, 参与免疫调节、与自身免疫病的发生有关

B2(CD19+CD5-):受外来抗原刺激, 产生高亲和性特异性抗体

NK细胞分析

NK(CD3-CD16+CD56+)

2）淋巴细胞功能分析

细胞介导细胞毒性试验(死细胞与活细胞比例)

细胞内细胞因子测定

3）淋巴造血系统及白血病免疫分型

对淋巴瘤和白血病进行多色免疫分型

用于选择化疗方案、判断预后及检出微小残留病变

4）肿瘤耐药基因分析

MDR(+)表示对化疗药物耐药

5） AIDS病检测中的应用

CD4+Th细胞、CD4+/CD8+比例

6）流式细胞仪的临床应用

HIV免疫分型，CD4绝对计数

白血病和淋巴瘤的免疫分型

肿瘤的细胞周期和倍体分析

网织红细胞计数

细胞移植的交叉配型和免疫状态监测

干细胞计数

残量白血病细胞检查

HLA-B27检查

血小板功能及相关疾病

7）流式细胞仪的科研应用

在免疫学研究中的应用:

鉴定免疫细胞类型

抗原特异性T细胞研究

细胞因子分泌细胞研究

全血细胞研究

凋亡检测

细胞增殖检测

干细胞向免疫细胞分化的研究

转染荧光蛋白细胞系研究

稀有细胞检测

在神经生物学研究中的应用：

神经干细胞和神经祖细胞的特性研究；

不同类型的神经细胞的鉴定和功能研究；

星形胶质细胞和胶质细胞的鉴定和功能研究；

检测细胞活性，细胞凋亡和细胞周期；

神经细胞发育过程研究；

干细胞向神经细胞分化研究

在肿瘤研究中的应用：

细胞凋亡的检测；

细胞周期分析；

细胞增殖研究；

荧光蛋白分析；

肿瘤干细胞的鉴定和功能分析；

循环肿瘤细胞的鉴定和功能分析；

实体瘤细胞的检测分析（肿瘤组织解离成单细胞后）；

肿瘤细胞系表型分析；

细胞活性的检测；

在细胞生物学和分子生物学研究中的应用：

检测细胞转染效率；

检测转导效率；

分析细胞中荧光蛋白的表达；

分析蛋白—蛋白之间的相互作用；

分析细胞活性，细胞凋亡，和细胞周期；

研究细胞的分化过程；

研究细胞增殖；

在高通量检测和新药研发中的应用：

细胞功能变化的研究；

细胞周期和活性；

细胞凋亡；

细胞增殖；

新药研发；

培养基研发；

海洋生物学

富集和分析细菌，藻类，浮游植物等

微生物学

细菌和酵母检测；

荧光蛋白检测。

生物燃料

Bodipy®和/或 Nile Red中脂类的定量

藻类，蓝藻细菌，酵母和细菌等生物的富集

本周小编将带来流式细胞法的热门应用。