设计qPCR实验时需要避免的错误——来自罗氏科学家的提示

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当设计qPCR实验时，最重要的是什么？
主要需要避免的是不同的寡核苷酸（引物/引物或引物/探针）之间的相互作用。互补的寡核苷酸序列会大大影响实验的特异性、产量和灵敏度。在最坏的情况下，引物二聚体的扩增量可能远大于目标产物。对于一些不太明显的相互作用，如部分互补或错配事件，也可以影响实验结果。因此，最适的熔解温度（Tms）对于引物和探针来说是十分重要的。引物的Tms应该接近合适的扩增温度，而探针的Tms应略高于引物Tms以确保探针在引物扩增前探针已经与目标片段结合。这样的最适温度对于每个寡核苷酸来说，都提供足够了的特异性与目标序列结合，同时不会出现可能引起错配的过于稳定的引物。

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在设计qPCR实验的过程中，你认为科学家们最经常遇到的错误是什么？你认为应该如何避免这种失误呢？
对你的实验来说，最重要的是真实的性能、精确度以及灵敏度。设计实验中最容易被忽视的是缺乏特异性导至实验结果受到影响。原因可能是过于低的Tms引起，不平衡的Tms或错配。为了避免这种情况，需要检查序列中每个核苷酸。

一些可以帮助快速选择最佳实验的技巧

除了优化设计，对你的实验来说，最重要的是真实的性能、精确度以及灵敏度。在时间有限的情况下，进行平行实验是一种帮助选择表现最好的实验设计的方法。最终，这是一个在优化时间和金钱之间的权衡。

有最适方案吗？
罗氏Bio-Industry的RealTime ready assays对于预验证和功能测试分析实验来说是一个很好的方案。每个实验都已经在LightCycler®480实时PCR系统上进行验证。在线配置允许用户选择感兴趣的目标，实验由罗氏Bio-Industry生物信息学专家设计并检测。一旦你的实验或者实验检测多孔板送到你的实验室，没有必要花时间或金钱做额外的优化，你可以快速开始进行实验。

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由于数据本身的特性，经常很难进行报告。此外，演讲技巧往往被忽视，但在公开场合的演讲技巧对于想法的传播是至关重要的。如何进行科学报告？以下是六组“要做”和“不要做”的建议。
准备工作
要做：
牢记自己的中心思想
用中心思想来做开头和结尾
列出重点
记得总结
练习，练习，练习
不要做：
被自己的故事或者笑话逗笑
PPT做得很意识流
太多动画
过于艳丽明亮的背景颜色

集中于你的中心思想
要做：
简明扼要
在幻灯片中只保留事实和结论
尽量避免使用缩写
用图片来帮助解释中心思想
展示出故事主线
不要做：
节奏沉闷
直接读幻灯片
幻灯片上文字太多

科学数据型幻灯片
要做：
确保你的观众能看清楚你的图表（包括最后一排的观众）
为你的数据点选择对比色和图案
幻灯表标题要为结论做提纲
有逻辑地整理你的数据
不要做：
图标太小
忘记图例
把数据都挤在一张幻灯片里

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保持与你的观众互动
要做：
展示你的知识，掌控想要给观众传递的信息
持续向观众提问以获取他们的注意力
面对观众讲话，不要一直看屏幕
不要做：
用你的听众或者他们的知识举例
背对观众

解决问题
要做：
做好接受提问的准备
如果被问到的问题无法理解，请提问者重复或者解释一下问题
重复一遍问题，确保正确理解提问者的意图
不要做：
回答不知道答案的问题

个人表现
要做：
对自己的专业程度充满信心
幽默
记得最好的演讲家，也有初学的第一天
不要做：
过于苛求自己
觉得大家都能看出你的紧张
嚼口香糖

专注于你觉得能最大程度影响你的报告风格的领域，你也可以询问你的观众，获得反馈以提高你的表现。
最后，就像爱因斯坦说的：“如果你无法用简单的方式讲解，那你一定不理解它。”

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房颤是一种常见的心律失常疾病。在人口老龄化、慢性心脏病及其它因素影响下，我国已成为房颤的第一患病大国。根据最新发布的《2015年中国心血管病报告》，35至59岁人群心房颤动的患病率为0.77%，这意味着我国大约有1,000万房颤患者。房颤患者心房不能有效收缩，容易在心房内形成血栓。如果形成的血栓随着血液泵出心脏，容易引起血管栓塞，其中危害最大的栓塞并发症就是脑卒中，即中风。

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和其他原因引起的中风相比，房颤导至的中风更凶险。北京朝阳医院心脏中心副主任刘兴鹏主任表示：“我们应该帮助患者认清房颤背后‘中风’这只‘猛虎’，提高对中风的长期防范意识，以减少房颤导至的中风事件的发生。”

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我国首部《心房颤动抗凝治疗中国专家共识》指出，房颤患者的卒中发生率是非房颤患者的2至7倍。抗凝治疗能够有效地降低房颤患者血栓疾病的发生率，口服抗凝药华法林可使房颤患者发生卒中的相对危险度降低64%。然而，我国患者对房颤的危害认识不足，普遍缺乏抗凝管理意识。根据《2015年中国心血管病报告》显示，接受华法林抗凝治疗的患者不足1%。

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此外，由于华法林的疗效容易受到饮食和其它用药的影响，因此需要定期检测INR值，并据此基础及时调整华法林的使用剂量。INR水平是由世界卫生组织推荐的计量单位，安全有效的目标值范围为INR 2.0-3.0。INR超出目标范围时，提示药量过大，患者有出血的风险；INR低于目标范围时，提示药量过小，患者有血栓形成的风险。INR监测对于指导患者合理用药及规避出血风险或形成血栓具有非常重要的指导意义。抗凝治疗个体化要求高，服用华法林的患者需要至少每月检测一次INR值，然而在接受华法林抗凝治疗的患者中，能坚持规律检测INR值的患者较少，造成治疗效果不理想的现状。

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罗氏诊断康固全®（CoaguChek®）凝血检测仪，采用新型INR指尖血检测方式，仅需一滴血，一分钟内即可得到高准确度的检测结果，避免了静脉抽血的不便，方便患者随时随地完成INR值自我检测，并减少了服用华法林患者需定期前往医院检测的麻烦。研究表明，使用这种便捷的INR检测方法，能够提高患者的检测频率和依从性。INR检测的频率越高，患者发生并发症的几率就越低。当INR值超出目标范围时，患者再到医院就医咨询调节用药剂量，为服用华法林的患者提供了更多的安全保障和生活、工作的便捷。

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罗氏诊断中国总经理黄柏兴先生教授表示：“罗氏诊断很高兴能够参与到此类公益活动中，共同为提升公众对于房颤的认识、降低房颤及其并发症的危害做出努力。定期进行INR检测有助于患者合理用药，确保达到合适的抗凝强度，实现安全有效的抗凝治疗，对于预防和降低房颤相关卒中发生率具有非常重要的指导意义。未来，罗氏诊断将继续为中国患者提供优质的检测产品和服务，造福更多患者，实现罗氏诊断对于中国的长期承诺！”

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尿液干化学分析——尿液筛查的第一步

肾单位是组成肾脏的结构和功能的基本单位，包括肾小囊、肾小球和肾小管。肾小球为血液过滤器，当循环血液流经肾小球时，血细胞和大分子蛋白质留在血液中；而约5-10%的所有溶质，包括小分子蛋白质和肽类物质的血浆被近端肾小管过滤，肽类物质被肾小管上皮细胞重吸收。当肾小球滤过膜损伤时，蛋白大量滤出并超出肾小管重吸收能力进入尿液，出现蛋白尿。由于滤出的蛋白具有粘性，在远端肾小管凝固后形成管型，造成肾小管堵塞，从而导至肾小球受损；此外，蛋白尿还可持续对肾脏构成危害。Walz博士指出，蛋白尿是肾脏疾病的早期标志，在临床诊断和预诊中非常重要，若能在肾脏疾病形成早期发现蛋白尿，可帮助实现早诊早治，将患者所受的伤害降到最低。

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目前，医院的尿液常规检测包括干化学尿液分析和尿有形成分分析。实验室现广泛采用干化学尿液分析，常被称为“尿十联”检测，对包括尿蛋白在内的十余项尿常规指标（白细胞、隐血、酸碱度、尿比重、葡萄糖、尿酮、尿蛋白、亚硝酸盐、颜色、浊度、胆红素、尿胆素原）进行半定量筛查检测，是临床尿液化学检测的主要手段。

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值得注意的是，“尿十联”检测中的酸碱度、白细胞检测粒细胞酯酶、葡萄糖和尿酮、尿蛋白、红细胞和尿比重检测项目必须通过试纸完成。而一杯果汁可使人体每毫升尿液中的维生素C含量增至10mg，维生素C的强还原性会影响潜血、血红蛋白、葡萄糖和亚硝酸盐的实验分析结果，建议选取能够抗维生素C干扰的检测试纸以避免假阴性或不必要的复检。同时，Walz博士强调，为确保结果准确可靠，进行尿液检测时应选取新鲜的二次晨尿作为样本，并确保采集过程无污染。

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罗氏诊断cobas® u 601全自动尿液分析仪采用高度稳定的试纸，其在机稳定性高达两星期，不受维生素C干扰；吸液前能将样品充分混合，无携带污染，使用三个波长检测，有效避免假阳性结果，提供可靠的干化学尿液分析结果。

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