6大技术，搞定病理分子精准诊断

检验之星

随着医学的发展，表皮生长因子受体阻断剂、单克隆抗体、抗肿瘤血管生成的药物等，已经应用于肿瘤的临床治疗。传统的以形态学为基础的组织学观察、免疫组化、透射电镜、免疫电镜等病理诊断技术所提供的信息已经远远满足不了精准医疗的需要。

目前常用的分子病理检测技术有：原位杂交（ISH）、荧光原位杂交（FISH）、基因突变检测、基因重排及染色体异位检测、流式细胞技术等。

1、原位杂交技术

原位杂交（ISH）是以核酸碱基互补配对原则为基础发展起来的检测技术，主要是利用DNA序列的互补性，通过标记的DNA探针与预处理的待检测样本的DNA进行原位杂交，其主要特点是把病理形态学观察与分子生物学技术结合起来，不仅可检测出特异的基因及其产物，而且可观察到其在不同细胞中的分布情况。

肿瘤诊断中常用于检测EBV、HPV等，以协助EBV相关肿瘤和HPV相关肿瘤的诊断和鉴别诊断。

2、荧光原位杂交检测技术

荧光原位杂交（FISH）是在原位杂交的基础上发展起来的，杂交探针用荧光物质标记，在荧光显微镜下观察，对荧光信号进行辨别和计数，即可对细胞、组织样本中的染色体或基因异常进行检测和诊断。

FISH的特点是特异性、敏感性和分辨率均较高，现已成为常规检测手段，广泛应用于肿瘤诊断（如血液肿瘤、软组织肉瘤的染色体异位等）、靶向药物靶分子检测（如乳腺癌HER2基因扩增，肺癌EGFR基因扩增等）及肿瘤早期诊断及复发（如膀胱癌患者尿液中检测3.7.9.17号染色体异常等）方面的检测。

3、基因突变检测

基因突变检测在分子靶向治疗筛选适用人群中起决定性作用，如检测肺腺癌组织EGFR、KRAS基因突变，结直肠癌KRAS、BRAF、PI3K基因突变，胃肠道间质瘤（GIST）、c-KIT、PDGFRA基因突变，是选择易瑞沙、爱必妥、格列卫等分子靶向治疗药物的前提。

目前的检测方法有DNA序列测定、实时PCR（real-time PCR）技术和焦磷酸测序、高分辨率溶解曲线、ARMS法等。检测方法各有优缺点，实际工作中应结合样本及检测方法的特点，选择合适的检测方法以提高准确性。

4、基因重排

抗原受体基因克隆性重排检测，是除免疫表型分析外淋巴瘤诊断有力的辅助工具，主要应用于淋巴瘤和淋巴结反应性增生性病变的诊断和鉴别诊断。

单克隆重排的T、B细胞受体基因是相应的T、B淋巴细胞肿瘤的典型特征，并可以用相对保守区的引物通过PCR技术扩增出来。正常淋巴细胞群体具有长度不等的受体基因重排DNA片段及多克隆性群体。

5、染色体易位

染色体异位是指2条非同源染色体同时发生断裂，所形成的断裂片段移至另一条染色体断端，并连接形成新染色体，常见于淋巴造血系统肿瘤及骨和软组织肉瘤中。

由于染色体异位具有特异性，为非随机性，对肿瘤具有鉴别诊断意义。例如染色体异位t（X;18）（p11.2;q11.2）及其导至的SYT-SSX基因融合是滑膜肉瘤的分子遗传学特征，检测SYT-SSX融合基因及其产物有助于滑膜肉瘤的鉴别诊断。

6. 流式细胞技术

用于流式细胞技术的样本是单细胞悬液。可以是血液、悬浮细胞培养液和各种体液（如胸水、腹水、脑脊液）、新鲜实体瘤或石蜡包埋组织的单细胞悬液等。

流式细胞术在医学基础研究和临床检测中有多方面的应用，如外周血细胞的免疫表型测定和定量分析；某一特定细胞群的筛选和细胞收集；细胞多药耐药基因的检测；癌基因和抑癌基因的检测：细胞凋亡的定量研究；细胞毒功能检测以及细胞内某些蛋白质和核酸的定量分析等。

应注意的是单细胞悬液样本的质量直接影响流式细胞检测结果，一般而言，新鲜细胞或组织样本优于已固定的组织样本。

精准医疗下的肿瘤分子病理检测新技术不断涌现，有助于患者的个体化诊断和治疗，最终为改善患者预后、提高生存质量保驾护航。

作者：qingqibing

来源：医学界肿瘤频道