用经过改进的LAMP检验诊断显症状的恶性疟疾

莺歌燕舞

通过核苷酸扩增的方法对疟疾进行分子诊断需要复杂而昂贵的仪器，一般只有实力雄厚的实验室才具备。

环介导恒温扩增(LAMP)已为容易适应的分子技术提供了一套新平台，无需昂贵仪器就能对疟疾进行分子诊断。

设在孟加拉国达卡市的国际腹泻病研究中心的科学家与北美的同行合作收集血样，包括106份显微镜检阳性的恶性疟原虫感染样本和105份显微镜检阴性样本。所有受试者都有发热病，疑似疟疾。由经验丰富的显微镜学家对厚涂片和薄涂片进行常规显微镜检。

用生命技术公司(Grand Island, NY, USA)的英杰SYBR Green I超级混合物UDG提取DNA并执行实时聚合酶链反应(RT-PCR)。新设计的一组引物靶向18S核糖体核糖核酸(rRNA)基因，可检测全血样本中的恶性疟原虫。日本东京荣研化学株式会社的LAMP采用了这组新引物，这项研究通过比较以前描述的LAMP引物组评估了荣研化学株式会社的LAMP。用显微镜检和实时PCR作为检测恶性疟原虫的参照方法。在LAMP反应中预先加入羟基萘酚蓝(HNB)引起明显的变色，因而改进了目测检测系统。

实验发现新型LAMP测定相较显微镜检的灵敏度为99.1%，相较实时PCR的灵敏度为98.1%，相对于显微镜检和实时PCR的特异性分别为99%和100%。改进的LAMP方法能在35分钟内检测至少5只寄生虫/微升感染血，而这项研究所测试的另一种LAMP方法扩增60分钟后最少能检测100只寄生虫/微升人血。

该研究的论文发表于2014年3月5日的《Acta Tropica》杂志。作者总结说，新的LAMP方法诊断显症状的恶性疟疾灵敏度和特异性都很高。这一方法能作为PCR的替代性分子诊断工具，也许还能成为标准方法，得到更广泛的应用。再者，这一方法极其有望成为保健检查和流行病检查中疟疾的床旁诊断和治疗监控的实用工具。