ELISA技术的基本原理

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ELISA技术的基本原理
背景说明
作者编辑：[深圳市恒昊生物科技有限公司]
ELISA的基本原理是将抗原（或抗体）结合到固相载体上，并将抗原（或抗体）与某种酶连接成酶标记抗原（或抗体），在检测时，将待检样本和酶标抗原（或抗体）按一定程序与固相载体上的抗原（或抗体）反应，然后用洗涤的方法去除未反应的部分，加入底物后，底物被结合在固相载体上的酶催化产生有色物质，通过酶标物显色的深浅间接反映被检抗原或者抗体的存在与否或者量的多少。
ELISA有3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体，即免疫吸附剂；②酶标记的抗原或抗体，即标记物；③酶作用的底物，即显色剂。可用于检测抗原或抗体，根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件，可设计出各种不同类型的检验方法，常见的有直接法、间接法、夹心法、竞争法。


图 ELISA技术原理示意图（Gan et al., 2013）。
1、直接（Direct）ELISA
用抗原（Ag）包被平板，并加入带有酶的一抗。当添加底物时，反应发生，并且与抗体-抗原相互作用的量成正比。
2、间接（Indirect）ELISA
用已知抗原包被平板，待一抗与抗原结合后，加入与一抗体结合的二抗，二抗体包含与底物发生反应的酶。
3、夹心（Sandwich）ELISA
夹心ELISA通常需要使用匹配的抗体对，其中每个抗体对抗原分子的不同、非重叠部分（表位）具有特异性。第一抗体（称为捕获抗体）被包被到孔中。然后将样品溶液加入孔中，第二抗体（称为检测抗体）遵循此步骤以测量样品的浓度。
4、竞争（Competitive）ELISA
也称为抑制ELISA，是一种基于表面/板的测定，板中涂有对感兴趣的分子具有反应性的捕获抗体。将样品（含有感兴趣的天然分子）和酶联重组蛋白（竞争分子）加入包被的孔中，潜伏期后，洗掉未结合的抗体。之后，将酶底物添加到每个孔中，转化为蓝色沉淀物，通过加入酸终止溶液使沉淀变成黄色，并在450nm处读取黄色沉淀的浓度以获得吸光度（OD值）。


图 不同类型ELISA检测概述
表 4种ELISA检测方法的比较

方法	检测物	优点	缺点
直接ELISA	抗体	无二抗标记，可避免交叉反应	在高背景信号下，耗时且灵活性低
间接ELISA	抗体	通用性和敏感性较高；具有成本效益；可使用不同的检测策略	交叉反应几率较高；实验步骤复杂
夹心ELISA	抗原	高度灵活、灵敏和特异；无需纯化抗原；可使用不同的检测策略	抗原需具有两个以上的抗体结合位点；抗原需求量较大
竞争ELISA	抗原	适用检测比较不纯的样本，数据再现性较好	整体的敏感性和专一性较差

服务流程

服务流程
客户在线下单——订单/实验材料确认——标准品制备——样品稀释——样品（抗原）孵育——抗原抗体复合物形成——信号检测（可选比色法、荧光法、化学发光法等）——出具实验报告
服务内容及说明

服务内容及说明
适用范围
ELISA检测肽、蛋白质、抗体和激素的多功能性以及生成定量和定性数据的能力使其成为最流行和最强大的免疫测定法之一，广泛应用于临床医学、生物技术、药理学和食品工业。
客户下单及项目信息填写
在我司官网http://www.biorun.com/进行注册或登录，请客户按照页面提示填写项目名称、选择项目类型、填写个人信息及联系方式，提交项目所需要的具体信息，包括：
1、检测方法；
2、待检样本名称、种属、指标、数量、来源等；
3、尽可能丰富的相关资料、文献。
实验信息
实验过程中客户可以随时登入管理系统查看项目实时进展情况。实验结题时系统会通过短信自动通知客户，并发送实验报告查看网址。实验结题后，实验报告、检测结果可在线查看或打印，并永久保留。
实验周期
致电详询
实验交付内容
1、所有实验的原始数据（包括实验过程、实验试剂与设备等）；
2、检测结果分析报告；
3、实验报告

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