目的：本文用于实时逆转录-聚合酶链反应（real-time RTPCR, rRT-PCR）试剂盒体外定性检测呼吸道和血清标本中2019新型冠状病毒（2019-nCoV）。针对2019新型冠状病毒设计引物和探针组合，用于SARS样冠状病毒的通用检测和2019新型冠状病毒的特异检测。 方案应用的限制性：除本文所述的平台或化学方法，其他提及的rRT-PCR检测尚未经过验证。 生物安全注意事项 处理临床标本时，应穿戴适当的个人防护用品（例如防护服、手套、护目镜）。标本处理应遵循二级生物安全等级或更高标准，并在经认证的II级生物安全柜中进行。更多相关信息请参阅： ●采集、处理和检测疑似患者（PUI）临床标本中2019新型冠状病毒（2019-nCoV）的暂行准则 https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-nCoV/guidelines-clinical-specimens.html ●微生物和生物医学实验室的生物安全（第5版） http://www.cdc.gov/biosafety/publications/ 可接受的标本 ●呼吸道标本包括：鼻咽或口咽抽吸物或洗液、鼻咽或口咽拭子、支气管肺泡灌洗液、气管吸出物和痰液。 ○拭子标本只能用带有铝杆或塑料杆的人造合成拭子头（例如聚酯纤维或涤纶）收集。不允许使用木杆的海藻酸钙或棉质的拭子头。 ●血清 标本处理和储存 ●标本采集后在4℃最多保存72小时。 ●如果不能及时检测，则将标本在-70 ℃或以下保存。 ●提取的核酸应在-70℃或以下保存。 标本拒收标准： ●标本未保存在2-4℃（≤4天）或冷冻在-70℃及以下。 ●标本标签或记录不齐全。 ●标本类型不合适。 ●标本量不足。 免责声明：以下列举的供应商或制造商的产品是适用的，但不代表获得疾病预防控制中心的认可。 试剂与耗材 ●实时逆转录-聚合酶链反应的引物/探针组合 ●阳性对照 ●TaqPath™1-Step RT-qPCR预混液，CG（ThermoFisher；货号A15299） ●无核酸酶的分子级水 ●一次性无粉手套 ●P2/P10、P200和P1000气溶胶屏障的吸头 ●无菌、无核酸酶的1.5 mL微量离心管 ●0.2 mL PCR反应管条或96孔实时PCR反应板和光学8联管盖 ●实验室记号笔 ●适用于1.5 mL微量离心管和96孔0.2 mL PCR反应管的冷却冰盒 ●1.5 mL微量离心管架 ●可接受的表面清洁剂 ○DNAZapTM（Life Technologies；货号＃AM9890） ○DNA AwayTM（Fisher Scientific；货号21-236-28） ○RNAse AwayTM（Fisher Scientific；货号21-236-21） ○10%的漂白剂（1:10稀释的5.25%-6.0%次氯酸钠） 仪器设备 ●PCR工作站[紫外线灯；层流（100级HEPA过滤）] ●涡旋混合器 ●小型离心机 ●微量移液器（2或10 μL、200 μL和1000 μL） ●多通道微量移液器（5-50 μL） ●2x96孔冰盒 ●-20℃（无霜）和-70℃冰箱；4℃冰箱 ●实时PCR检测系统 ●核酸提取系统 ●基于rRT-PCR扩增技术的检测性能取决于模板RNA的数量和质量。在检测标本之前，应鉴定和验证RNA提取程序的回收率和纯度。 ●已证明可获得高度纯化RNA的商售提取程序包括：bioMérieux NucliSens®systems, QIAamp® Viral RNA Mini Kit, QIAamp® MinElute Virus Spin Kit 或RNasy®Mini Kit (QIAGEN), EZ1 DSP Virus Kit (QIAGEN), Roche MagNA Pure Compact RNAIsolation Kit, Roche MagNA Pure Compact Nucleic Acid Isolation Kit, RocheMagNA Pure 96 DNA and Viral NA Small Volume Kit和 Invitrogen ChargeSwitch®Total RNA Cell Kit. ●保留剩余标本和提取的核酸，立即保存至-70℃。 ●仅复融当天需检测的核酸标本数量。在测试之前，勿冻融核酸标本超过1次。 |
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