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常见PCR技术及分子诊断原料

发布者: Okay欧凯 | 发布时间: 2023-8-18 10:03| 查看数: 65852| 评论数: 0|帖子模式

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1. 热启动PCRHot Start PCR
在反应达到高温前使用物理屏障(如蜡珠特定抑制剂或抗体)抑制聚合酶,减少通常通过低温非特异性引物退火观察到的非特异性扩增
2. 逆转录PCRRT-PCR
常规PCR技术适用于使用RNA分子作为模板、逆转录酶作为酶来逆转录cDNA分子。 RT定量PCR可用于研究基因表达、疾病诊断以及将真核基因插入原核生物中。
3. 微滴式数字PCRddPCR
可直接定量测量绝对DNA浓度,无需标准曲线,是一种单分子计数方法。其中单个样品被分成多个组分,并且所有这些级分均通过标准PCR方法进行分析。该方法可以对背景噪音中低水平的DNA进行分析,结果以数字方式记录为阳性或阴性。
4. PCRLong PCR
在长PCR过程中,使用热稳定性DNA聚合酶混合物来扩增长度超过5 kb的片段
5. 多重PCRMultiplex PCR
多重PCR通过使用多组引物来完成在一次PCR反应中扩增多个靶标该方法可用于病原体鉴定、高通量SNP基因分型及法医应用
6. 菌落PCRColony PCR
进行转化后,使用菌落PCR来筛选所需质粒的菌落。调整PCR步骤的长度和温度,以从添加到PCR混合物中的少量细胞中释放DNA此过程释放的DNA可用于扩增
7. 巢式PCRNested PCR
在常规PCR之后,将针对初始PCR扩增子内DNA序列特异的第二组引物添加到反应中。使用嵌套引物的第二个扩增步骤减少非特异性结合并增加扩增子产量。
8. PCR定点诱变(PCR Site-Directed Mutagenesis
PCR定点诱变,也称为位点特异性诱变或寡核苷酸定向诱变,是在DNA序列中引入突变或创建用于克隆目的的独特限制性酶识别位点的最重要实验室技术之一。
9. 实时定量PCRqPCR
与其他基因表达定量技术相比,qPCR具有显著优势。这些优点包括灵敏度和准确性、大动态范围、高通量能力、执行多重反应的能力更快、更可靠的扩增这种强大的技术已成为快速定量监测基因表达研究的首选方法。
其它PCR技术
值得一提的其他PCR技术可以列为等位基因特异性PCRARMS(扩增难治性突变系统)、组装PCR或聚合酶循环组装(PCA)、不对称PCR、拨出PCR、螺旋酶依赖性扩增、序列间特异性PCRISSR)、反向PCR、连接介导的PCR、甲基化特异性PCR,多重连接依赖性探针扩增(MLPA)、套式PCR、重叠延伸PCR或重叠延伸剪接(SOEing)、固相PCR、接触式PCR(逐步下降PCR)、数字PCR等。基本上,根据扩增的具体需要,PCR技术具有广泛的应用。

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