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夹心法-竞争法-25-羟维生素D临床检测

发布者: Okay欧凯 | 发布时间: 2023-6-30 15:30| 查看数: 49046| 评论数: 0|帖子模式

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25-羟维生素D临床检测
目前血清维生素D检测方法主要为液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)和化学发光免疫分析(CLIA)。国家卫生行业标准《WS/T 677—2020 人群维生素D缺乏筛查方法》推荐LC-MS/MS为第一方法,化学发光免疫法为第二检测方法。从原理上看,LC-MS/MS是基于被测生物标志物本身分子量、结构等化学性质的直接分析方法,具有高灵敏度和高特异性。CLIA是基于抗原抗体反应,与LC-MS/MS相比,前处理简单且检测自动化程度高。
LC-MS/MS
液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)是临床生化小分子检测的首选方法,常用于血清25-羟维生素D(25-OH-VD)的检测。LC-MS/MS结合了液相色谱(LC)的物理分离能力和质谱(MS)质量分析能力,可对未知化合物进行定性和定量分析。LC-MS/MS二级串联质谱分析技术,可同时利用母离子及碎片离子信息,选择性地监测被定量的化合物,即使是痕量的组分也不受丰量物质的干扰。对于小分子分析测定来说,LC-MS/MS具有很高的分析特异性和和检测灵敏度。
美中不足的是,LC-MS/MS分析结果易受样本中目标分析物以外的物质(包括来源于样本自身及方法建立过程中外部环境引入的物质)影响。为消除这种基质效应,提高LC-MS/MS分析结果的准确性,样品需要进行严格的前处理。对与尿液、口腔液、血浆等不同临床验本中的小分子进行检测时,需要根据基质净化效果、样品预期浓度、最低检出限要求等因素选择不同的前处理方式,以消除不同物质带来的基质效应。
化学发光竞争免疫检测
LC-MS/MS相比,基于抗原-抗体特异性结合的免疫检测技术操作简单、检测快速,是VD小分子质谱检测切实可行的替代方法。由于25-OH-VD分子量小,缺乏抗原表位,目前临床化学发光免疫检测普遍采用的是竞争法。竞争法属于试剂有限型分析,检测灵敏度相对较低;交叉反应率较高,易出现假阳;在痕量检测时难以与阴性样本区分,在样本低浓度范围会产生较大的误差。大量研究显示,VD竞争法与质谱检测结果的相关性较差,尽管有化学发光的加持,检测结果也不尽如人意。
中国医学科学院北京协和医院检验科与中日友好医院检验科血凝室的研究人员液相色谱串联质谱法LC-MS/MS)方法作为参照标准,比较了雅培、索林、IDS、罗氏、西门子5个厂家的自动化免疫学方法和测定25-OH-VD结果的一致性,结果显示不同检测系统检测结果相差较大。

小分子非竞争免疫检测技术与质谱相关性高达0.94
为解决免疫检测技术在小分子临床应用的技术难题,提高免疫检测与质谱检测结果的一致性,OKAYBIO研发团队不断实践、反复尝试,最终通过调整免疫策略、优化抗体设计,成功开发出适用于小分子非竞争免疫分析的抗体。

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