一文助你搞定 ELISA 实验！

青草

为什么，别人ELISA这么好看，我却在，苦思索：
ELISA实验要想做的好
细节必不可少
细节到位
实验数据精准那不是分分钟的事情嘛


师兄师姐总结的干货
哈哈，有了这份"秘籍"，
你就是下一个实验大佬


ELISA 实验流程


ELISA 细节盘点
1. 样本收集
每个标本量收集体积＝100ul×检测指标，如要做复孔，标本量收集体积＝100ul×检测指标×2。对收集后当天进行检测的标本，储存在4℃备用，如有特殊原因需要周期收集标本，将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存，避免反复冻融。标本2-8℃可保存48小时，-20℃可保存1个月。-70度可保存6个月。部分激素类标本需添加抑肽酶。如需离心的样本，离心转速不宜过高（2000~3000）
2. 加样
加样品时，单孔用量要求：≥50ul/指标，如需要做2个复孔则血量≥100ul/指标。如果样本量不充足，具体用量可咨询您的专属销售。


3. 样品捕获抗体孵育
37℃恒温孵育，避免温度变化过大


4. 洗涤
机洗：将25×洗涤缓冲液稀释成1×，1×洗涤缓冲液洗三次，每次加300uL浸泡60s
手洗：手洗次数应比机洗次数多，浸泡时间也应适当延长
手洗容易导致吸附在酶标板底部的试剂脱落，从而导致结果偏小，手洗次数过多也会影响实验结果，建议机洗


5. 底物显色（TMB显色）孵育
TMB在使用前应放置室温平衡30分钟，加的量为A、B各50uL
6. 终止液终止反应
加完TMB终止液应让其混匀再在酶标仪上读数
7. 酶标仪读数
在450nm波长处测定O.D值
8. 根据O.D值计算样本浓度
使用软件拟合标准曲线，根据标准曲线的拟合度（r或R2）以及残差平方和（s）选择合适的曲线






实验步骤更简单
不加样本稀释液，50ul待测样本可直接加样。


实验更省时
采用升级版一步法检测，可节省至少30 mins


实验结果更精准

采用进口抗体，灵敏度更高。


实验更人性化

可根据老师的样本情况，定制检测范围。
<hr/>  文章来源于江莱生物（shjianglai666）

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