ELISA实验全攻略：将「翻车」变「完美」

John

ELISA（酶联免疫吸附试验）——这个听起来像是某种高科技厨房设备的实验方法，其实是用来检测生物样本中各种分子的“侦探工具”。虽然ELISA技术已经相当成熟，但就像做菜一样，即使有了食谱，也难免会碰到“糊锅”或“盐放多了”的情况。下面，我们就来聊聊ELISA实验中的那些“翻车现场”以及如何变“完美”。



图1 elisa实验步骤

翻车现场一：信号弱得像没睡醒，背景却高得像夜店
· 试剂浓度不对：可能是酶标记二抗太“懒”，底物太“抠门”。
· 反应液加多了或加少了：就像调酒，比例不对，味道就怪。
· 洗涤不彻底：洗得不够干净，背景噪音就像隔壁装修，吵得你心烦。
· 孵育温度不对：温度太高或太低，抗体和底物就像在桑拿房或冰箱里工作，效率自然低。
· 孵育时间不对：时间太短，反应还没“睡醒”；时间太长，信号已经“喝高了”。
救场方法：
★ 检查试剂浓度和孵育条件，别偷懒，按说明书来。
★ 洗板要像洗碗一样认真，多洗几次，别让非特异性结合物“赖着不走”。
★ 控制底物反应时间，别让信号“过劳”或“偷懒”。
★ 用封闭液（如5% BSA或非脂肪奶粉）把板孔“堵上”，减少非特异性结合。
翻车现场二：结果像“乱点鸳鸯谱”
· 封闭不充分：封闭液没盖好板孔，或者封闭时间太短，非特异性结合就像“第三者插足”。
· 抗体不够专一：抗体“花心”，见谁都结合，结果自然乱套。
· 样本里有“捣蛋鬼”：样本中的杂质就像“搅屎棍”，搞得实验一团糟。
救场方法：
★ 增加封闭液的量和时间，确保板孔“密不透风”。
★ 预处理样本，稀释、过滤、清除干扰物质，别让“捣蛋鬼”捣乱。
★ 在洗涤液或缓冲液里加点表面活性剂（如Tween-20），减少非特异性结合。
翻车现场三：结果像“薛定谔的猫”，每次都不一样
· 操作不一致：试剂、时间、温度像“变脸”，结果自然不稳定。
· 标准曲线不准：标准品质量差，或者操作不规范，曲线像“过山车”。
· 实验条件失控：温度、湿度像“天气”，说变就变。
救场方法：
★ 确保每次实验条件一致，别让操作像“抽风”。
★ 每次都用新标准品，确保标准曲线准确。
★ 控制环境条件，别让温度湿度“放飞自我”。
★ 多次重复测量，减少偶然误差。
翻车现场四：标准曲线像“抽象画”
· 标准品浓度不准：标准品被污染或储存不当，浓度像“股市”，波动大。
· 稀释操作不准：稀释标准品时，操作像“手抖”，浓度误差大。
· 酶标仪设置不对：波长设置不合适，反应时间太短，曲线像“鬼画符”。
救场方法：
★ 用高质量标准品，确保储存条件正确。
★ 稀释标准品时，操作要像“绣花”，一丝不苟。
★ 校正酶标仪，确保波长和反应时间合适。
★ 重新绘制标准曲线，确保线性关系。
ELISA实验就像一场精密的“交响乐”，每个步骤都要恰到好处。通过排查问题、优化条件，你可以让这场“音乐会”更加和谐动听。关键是要标准化操作，控制变量，确保试剂和设备的质量，以及样本处理的规范性。

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