干货！柱式法核酸提取，从原理到实操，一篇搞定！

病理医师

一、实验原理
核酸柱提法的原理基于以下几个关键方面：
1、细胞裂解与核酸释放：利用含有强变性剂（如胍盐）的裂解液处理细胞或组织样本。胍盐能迅速破坏细胞结构，使蛋白质变性，从而将核酸（包括RNA）释放到溶液中。同时，胍盐可有效抑制RNA活性，避免RNA在提取过程中被降解。
2、特异性吸附：裂解后的样本溶液与硅基质吸附柱接触。在高盐浓度环境下，RNA分子能够与吸附柱的特殊膜材料发生特异性吸附，而其他杂质（如蛋白质、DNA、多糖等）因不具备这种特异性结合能力或结合较弱，大部分留在溶液中。
3、杂质去除：通过向吸附柱加入含有乙醇等成分的洗涤缓冲液进行洗涤操作。乙醇有助于去除残留的蛋白质、盐离子及其他小分子杂质，进一步提高RNA的纯度。洗涤过程中，杂质会随着洗涤液流出吸附柱，而RNA依然吸附在柱上。
  4、RNA洗脱：使用低盐缓冲液或无RNA的水改变RNA与吸附柱的结合环境，使 RNA 从吸附柱上解吸下来，从而收集到高纯度的RNA样本，用于后续的实验研究。
二、实验流程


1、样本采集与预处理
a. 对于组织样本，需迅速采集并置于液氮中速冻，防止RNA降解，随后在研钵中充分研磨成粉末状，保证细胞充分破碎；
b. 细胞样本则先收集离心，去除培养基，用预冷PBS洗涤后，加入适量裂解液重悬。
2、裂解与匀浆
将预处理后的样本加入含有胍盐等变性剂的裂解液，充分涡旋振荡或使用匀浆器进行匀浆处理，确保细胞完全裂解，释放出核酸物质，然后将裂解产物转移至离心管中。
3、吸附柱结合
a. 将裂解液上清转移至已平衡的硅基质吸附柱中，通常以8000 - 12000×g 离心1 - 2分钟，使RNA特异性吸附于吸附柱膜上。
b. 未结合的杂质则留在收集管中，弃去收集管内液体。
4、洗涤
向吸附柱中依次加入不同的洗涤液，如含有乙醇的缓冲液，每次加入后以相同转速离心，洗涤液依次去除蛋白质、盐离子和其他小分子杂质，一般洗涤2 - 3次，确保吸附柱上RNA的纯度。
5、洗脱RNA
在吸附柱中加入适量预先预热至适当温度（如 50 - 60℃）的无RNA水或专用洗脱缓冲液，室温静置1 - 5分钟后，以较低转速（如 4000 - 6000×g）离心1 - 2分钟，收集洗脱液，其中即含有提取的 RNA。


三、注意事项
1.RNA酶污染防控
a.RNA酶无处不在且极为稳定，实验前需用 RNAZaP等试剂彻底清洁工作台面、移液器等实验器具，并在超净工作台内操作；
b.实验人员全程佩戴手套，且频繁更换，避免手套接触可能污染RNA酶的物品；
c.使用经DEPC处理或无RNA酶的水、试剂和耗材，防止RNA被酶解。
2.样本质量与裂解效果
a.样本采集后应尽快处理，避免长时间放置导致RNA降解；
b.组织研磨要充分均匀，确保细胞完全破碎，裂解液应足量且与样本充分混合，保证RNA释放完全；
c.对于难裂解的样本，可适当延长裂解时间或调整裂解液配方。
3.离心操作要点
a.离心过程中确保离心机转头温度稳定，防止因温度过高影响RNA质量；
b.严格按照吸附柱和离心机的说明书设置离心速度和时间，过高转速可能损坏吸附柱膜结构，影响RNA结合与洗脱效果，过低则无法有效分离物质。
4.洗涤与洗脱细节
a.洗涤液加入吸附柱时应沿管壁缓慢加入，避免直接冲击柱膜，确保洗涤液均匀覆盖柱膜且不溢出；
b.洗脱液的pH值和体积需精确控制，pH不适宜可能降低RNA洗脱效率，体积过大或过小都会影响RNA终浓度和纯度。
四、产品介绍
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