挑选抗体之轻易不说的秘密（第一集）

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大家做实验，经常要用到抗体，但是往往不知怎么选抗体，买到不好用的抗体，浪费钱不说还耽误时间。其实挑选抗体还是有些窍门和小“秘密”的，今天Dr. T就给大家分享一些。先说清楚，会提及一些公司名字，但Dr. T可没有收任何广告费，还担着造谣的责任，大家不相信就转发500次试试吧！


       挑选抗体首先看清楚此抗体能用于什么。一是能不能用于咱要做的实验类型，不同厂家标注缩写不同，但大体看一眼大家都懂，比如W或WB都是指Western blot，E指ELISA，还有IHC、IP、IF。不废话，只是有一点，万一找不到对应的抗体怎么办？没办法，只有赌一赌了。没标识只是代表厂家没验证，不表示一定不行。二是能不能用于要检测的物种（H、M、Rat等），不多解释，这些大部分人都应该清楚，但万一也没有怎么办？这个就比较复杂，我会放到下一集讲。

接下来呢，就是记住几点好：

1
物种越远越好

        物种越远，蛋白质相似形性就越低，免疫识别就越容易，产生的抗体效价和特异性就越高。比如要检测human的蛋白质，那Chicken>Goat>Rabbit>Rat>mouse（“>”表示优于）。这也是为什么兔单抗出来后，很多情况下比鼠单抗好用（对于检测到是human的蛋白质来讲）的原因——物种更远了。兔单抗虽然看似贵些，稀释比可能是1：2000，鼠单抗则大多是1：200左右，实际用起来，哪个才是真便宜，你懂的。

2
储存条件-20°C的比4°C的好

        一般4°C保存的抗体，保质期说是多久（半年或者一年），基本就是那么久，甚至时间没过保质期也明显变差了，-20°C的抗体保质期说明书上可能只说一年，但实际上常常放上两三年也仍好用。但各位看官前面别听了我的话把说明书写4°C保存的抗体放到-20°C去！凡是标识为-20°C保存的抗体储存液（Storage buffer）都是添加了40%～50%的Glycerol。干嘛的？就是防冻剂。有了它-20°C就不会冻起来，没它可就难保了。抗体也是蛋白质，冻融一次就对蛋白质结构破坏一次，没看见说明书上都写着Avoid freeze / thaw cycle吗！




3
储存有BSA的比没有的好

        BSA——牛血清白蛋白。有什么用？蛋白质保护剂。一般BSA浓度为1%，在储存液中的含量远比抗体本身高，万一不小心混入了蛋白酶，先降解的也是BSA。因此有BSA的就更稳定、更耐降解一些。同时有了BSA，比单纯只有抗体这一种蛋白质时，抗体更不容易聚集、变性，也能起到一定程度的抗体稳定作用——这两者在血液里本来就是伙伴。

4
有图的比没图的好

        不管是WB还是IHC还是IF等，有图的说明验证过，而且结果还不错，没图的不是没验证过，就是太难看不好意思放上去。但是图里也有猫腻，我们下一集里再悄悄说。

5
多抗比单抗好

          这里“好”的意思是指适用性更广泛，效价更高，简而言之就是不容易碰到不好用的。为啥呢？多抗，顾名思义是由很多种克隆的抗体组成的复合物，不同的克隆识别的表位不一样，组合在一起就像是霰弹枪，不用怎么瞄准也能打到，而单抗就是步枪，打不中就只有再瞄准再打了（换另外的单克隆抗体）。因为单抗针对的唯一个抗原表位，抗体结构也是一样，如果这表位在咱要做的体系里碰巧有糖基化、乙酰化、磷酸化等等修饰，或者因为不同折叠方式的关系，表位被遮蔽甚至常在深处，单抗结合就会受到影响。所以大家留心看同一个蛋白质的多抗的稀释比，常常要高出单抗很多。不过对于抗体生产商来讲，单抗的质量更易控制，也易于生产规模的放大，导至他们更希望生产/卖单抗。另外，对于ELISA这样的定量实验，单抗稳定性重复性更好。因此抗体厂商不断努力去筛选适用范围广、特异性好、效价高的单抗，慢慢的，好的单抗也多起来了，比如CST的XP®，Abcam的RabMAb®，Sigma的Prestige Antibodies®金标抗体中的单抗就还不错，这些百里挑一，经多种验证的单抗效能接近多抗，有的还超过多抗，就不是普通步枪，而是狙击步枪了，命中率就高了。（没提到的勿怪，反正Dr.T没收任何广告费，想起什么说什么，一时没想起的，那也没办法了。）

         这一集先从技术原理上讲了些挑选窍门，下一集会讲一些经验性的技巧，对追求或要求高的看官，还会分享更复杂的高级技能，包括轻易不说的秘密，嘿嘿。

来源：吉凯基因

olina1027

如果抗体需要标记那么缓冲液中含有BSA会比较麻烦，比较好的方式可以用甘油替代