| 吸光度 吸光度,absorbance,是指光线通过溶液或某一物质前的入射光强度 与该光线通过溶液或物质后的透射光强度比值的对数，影响它的因素有溶剂、浓度、温度等等 吸光系数与入射光的波长以及被光通过的物质有关。只要光的波长被固定下来，同一种物质，吸光系数就不变。 当一束光通过一个吸光物质（通常为溶液）时，溶质吸收了光能，光的强度减弱。吸光度就是用来衡量光被吸收程度的一个物理量。 吸光度用A表示。 A＝abc，其中a为吸光系数，单位L/(g·cm),b为液层厚度（通常为比色皿的厚度），单位cm ， c为溶液浓度，单位g/L 影响吸光度的因数是b和c。a是与溶质有关的一个常量。此外，温度通过影响c，而影响A。 符号A，表示物质对光的吸收程度。 97801 式中I0是通过均匀的液体介质的一束平行光的入射光的强度；It是透射光强度；T是透射比。A值越大，表示物质对光的吸收越大。根据比尔定律，吸光度与吸光物质的量浓度c成正比，以A对c作图，可得到光度分析的校准曲线。在多组分体系中，如果各组分的吸光质点彼此不发生作用，那么吸光度便等于各组分吸光度之和，这一规律称吸光度的加和性。据此可以进行多组分同时测定及某些化学反应平衡常数的测定。在吸光度测定中，为抵消吸收池对入射光的吸收、反射以及溶剂、试剂等对入射光的吸收、散射等因素，可选用双光束分光光度计，并选光学性质相同、厚度相等的吸收池分别盛待测溶液和参比溶液。 紫外可见分光光度计工作原理:和红外光谱仪相似，利用一定频率的紫外--可见光照射被分析的有机物质，引起分子中价电子的跃迁，它将有选择地被吸收。一组吸收随波长而变化的光谱，反映了试样的特征。在紫外可见光的范围内，对于一个特定的波长，吸收的程度正比于试样中该成分的浓度，因此测量光谱可以进行定性分析，而且根据吸收与已知浓度的标样的比较，还能进行定量分析。 紫外可见分光光度法的工作原理:单色光辐射穿过被测物质溶液时，被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度（光路长度）成正比，即朗伯 - 比尔定律，这是吸收光谱法定量的理论依据，其关系式如式 3-1 ： A = ECL 式 (3-1) 式中 A 为吸收度 ； E 为吸收系数，即单位浓度、单位液层厚度的吸收度数值； C 为溶液浓度； L 为液层厚度。 光吸收定律: 郎伯比尔定律Lambert-Beer定律是吸收光度法的基本定律，表示物质对某一单色光吸收的强弱与吸光物质浓度和厚度间的关系。 1．Lambert-Beer定律的推导 ⑴Lambert-Beer定律的数学表达式 I0：入射光强（平行单色光）；I：透射光强 S：吸光物质截面积；l：吸光物质厚度 n：吸光质点（原子、离子或分子）数 dS = kdndS/S =（kdn）/S （负号表示光强因被吸收而减弱） ∵ S = V（体积）/ l（厚度），n = V·C（浓度） ∴ n / S = l·C Lambert-Beer定律的数学表达式：-lg(I/I0)= ECl [概念] 透光率(transmitance，T)：T = I/I0 吸光度(absorbance，A)：A = -lg T =-lg(I/I0)= ECl （A与C成正比关系） T = 10-A = 10-ElC（T与C成指数函数关系） ⑵Lambert-Beer定律的物理意义及成立条件 Lambert-Beer定律：当一束平行单色光通过均匀的非散射样品时，样品对光的吸光度与样品的浓度及厚度成正比，A = ECl。 2．吸光系数(absorptivity) [引入] Lambert-Beer定律：A = ECl中E为比例常数，称为吸光系数。 ⑴吸光系数的物理意义：吸光物质在单位浓度、单位厚度时的吸光度。是定性和定量的依据。 ⑵吸光系数的两种表示方法： 摩尔吸光系数（ε或EM）：在一定波长时，浓度为1mol/L、厚度为1cm时的吸光度。多用于分子结构研究。 百分吸光系数（比吸光系数，）：在一定波长时，浓度为1%（W/V）、厚度为1cm时的吸光度。多用于含量测定。 邻二氮菲比色测定铁的原理 方法原理 试样用盐酸或硝酸溶解。在微酸性介质中，铁与硫氰酸钾、1，10-二氮杂菲形成紫红色三元络合物，用甲基异丁基酮萃取该络合物，于分光光度计波长520nm处测量其吸光度。 试剂:甲基异丁基酮 过氧化氢（30%） 盐酸（1+1） 硝酸（1+1） 硫氰酸钾（500g/l） 1，10-二氮杂菲乙醇溶液（2.5g/l）：称取0.25g1，10-二氮杂菲溶解于100ml乙醇中。 铁标准贮存溶液：准确称取0.1000g(99.9%)于150ml烧杯中，加30ml盐酸（3.3），低温加热溶解，冷却至室温。移入100ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。此溶液1ml含10μg铁。 铁标准溶液：移取10.00ml铁标准贮存溶液(3.7)于1000ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。此溶液1ml含1μg铁。 仪器:分光光度计 试样:试样经900度预灼烧1h,并置于干燥器中冷却至室温备用. 金属试样需去掉表面氧化蹭,取样后立即称样. |
/3 
浙公网安备33010802005999号 
