杂交瘤细胞抗体基因测序与单克隆抗体的区别与原理

xiaoqin

杂交瘤细胞抗体基因测序与单克隆抗体的区别：

杂交瘤细胞抗体基因测序使用专业的兼并引物设计（degenerate primer）和测序方案，同时优化经济成本和时间成本，为客户提供快速准确的抗体可变区域以及全长基因测序服务。尽管杂交瘤细胞能够无限增殖并表达抗体，但是在长时间的细胞增殖和蛋白表达可能导至抗体基因发生突变以致表达的抗体失效。因此，获取杂交瘤细胞单克隆抗体基因序列对于大规模稳定表达单克隆抗体尤为重要。为了更好解决科研用户的需求，杂交瘤细胞抗体基因测序可基于PCR扩增技术的单克隆抗体基因测序服务。

相较于对单克隆抗体氨基酸序列的测序，单克隆抗体基因测序可以提供更准确更可靠的结果，并且能够更为准确地区分亮氨酸/异亮氨酸等在质谱鉴定中较难区分氨基酸。杂交瘤细胞有丢失高特异性高活性的风险，或者细胞状态不好乃至死亡。

而经过杂交瘤测序，可以获得相应的序列，可以以重组蛋白的方式来稳定获得抗体；从而使得研发或生产者不必以杂交瘤细胞为载体保留该抗体，而可以以碱基序列的形式进行保存和传播交流、鉴定。同时还可以使用获得的测序结果进行专利等知识产权方面的申请审批。有时为了进一步大规模生产或进行人源化等生物工程操作/修饰，很有必要了解杂交瘤所表达的抗体对应的基因序列以进一步进行生物工程操作与生产。

杂交瘤细胞培养的原理：

杂交瘤技术的原理是使免疫的小鼠脾细胞与具有体外长期繁殖能力的小鼠骨髓瘤细胞融为一体，成为杂交瘤细胞，最终获得既能产生所需单克隆抗体，又能长期繁殖的杂交瘤细胞系。

将这种杂交瘤细胞扩大培养,接种于小鼠腹腔,在小鼠腹腔积液中即可得到高效价的单克隆抗体。技术本身包括两种亲本细胞的选择与制备，细胞融合，杂交瘤细胞的筛选与克隆化。

(一)小鼠骨髓瘤细胞

细胞株稳定，易于传代培养

细胞株自身不会产生免疫球蛋白或细胞因子

该细胞是次黄嘌呤磷酸核酸核糖转化酶(HGPRT)的缺陷株

(二)免疫脾细胞

免疫用抗原尽量提高其纯度和活性，免疫途径多用腹腔内或皮内多点注射法

如为珍贵微量抗原，可用脾脏内直接注射法进行免疫

(三)细胞融合

PEG(聚乙二醇)可能导至细胞膜上脂类物质的物理结构重排，使细胞膜容易打开而有助于细胞融合。

(四)杂交瘤细胞的选择性培养

HAT培养液，是在基础细胞培养液内添加次黄嘌呤、甲氨蝶呤和胸腺嘧啶核苷

1.脾细胞(指B细胞)在一般培养基中不能生长繁殖

2.骨髓瘤细胞

因缺乏HGPRT而合成DNA，骨髓瘤细胞在HAT培养基中不能增殖而死亡

3.杂交瘤细胞

由骨髓瘤细胞和脾细胞融合形成的杂交瘤细胞

由于与脾细胞融合，可获得其HGPRT，可以合成DNA。因此，杂交瘤细胞在选择性培养得以生存而被筛选出来。

目前义翘神州提供杂交瘤细胞体外培养制备抗体的服务，可采用低血清或无血清培养基进行高密度体外培养，降低牛IgG污染，是国内外客户优选的杂交瘤细胞生产抗体方案。

具体详情可以参考：杂交瘤细胞培养及抗体生产服务：https://cn.sinobiological.com/services/hybridoma-culture-antibody-production-service