假病毒中和抗体检测方法及实验步骤

xiaoqin

    假病毒中和抗体检测是一种用于识别和定量特定的抗原或免疫球蛋白的免疫学组化技术。它可以帮助识别和定量特定的蛋白，用于诊断各种不同的感染、免疫性或遗传性问题。

    检测中和抗体的方法：

    在很多早期中和抗体的研究中使用实验室分离毒株、T细胞系和来自感染者的血清。多数情况下，使用T细胞适应病毒和T细胞系比使用原代分离病毒和PBMC更容易观察到病毒中和作用。重要的是，要复制体内的情况，有必要使用同源的原始病毒分离株和正常PBMC来测量中和抗体。这些检测方法中的成分使这方法最接近开展具临床意义的体内HIV中和潜能的检测。目前尚未正式定义原始分离株，但它通常指PBMC中复制的不超过3代，且通常自最初分离出不超过2个月的病毒。一些研究者建议使用未刺激的PBMC进行中和实验，因为体内细胞可能是未活化的。鉴于未活化的细胞可以表达不同的病毒辅助受体，此种检测方法有待进一步研究。

    近来的检测中多采用重组病毒技术和单周期病毒检测法，能检测到更高水平的中和抗体。但这些分析的临床意义有待评估。

    例如，最近研究表明HIV包膜假病毒与有同样的包膜糖蛋白的感染性HIV分子表现出相似的中和敏感性。然而，在PBMC中培养感染性分子克隆的中和敏感性却下降，此结果可能表明，PBMC中培养的病毒表面的包膜蛋白增加。此观察表明，这些较快速的中和抗体检测明显具有临床意义。

    尽管如此，这些区别是定量的而不是定性的，包膜假病毒与HIV-1原始分离株的中和敏感性相似。重要的是，随着疾病进展，中和抗体可以被增强抗体所取代。最近，一些病毒和方法已被推荐用来检测中和抗体反应，尤其是由疫苗诱导的中和抗体。

    假病毒中和抗体检测的步骤如下：

    1.将样本中的血浆或血小板进行分裂；

    2.将样本中得到的血小板与所需要测量的特异性IgG/IgM/IgA连合；

    3.添加适当量的真核表达载体（例如pCMV-HA-VLP）并将其加到另一个板上；

    4.在冷冻条件下将真核表达载体/特异性IgG/IgM/IgA复合物固定在另一个板上。

    5.用适当量的FITC标记单克隆antibody对复合物进行冲击波处理。

    6.由于FITC标记单克隆antibody在复合物上会形成一个竞争性发光信号，因此可以使用ELISA方法对复合物进行相应信号测量。

    7.测量出得到FITC信号之前、之后所得到信号之间差异大小以便作出相应评估。

    本方法能够用于快速、准确地评估人体对不同感染、遗传或者其他情况所产生不同水平的中和效能所对应耐药情况。

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