杂交瘤细胞的筛选方法和原理是什么？杂交瘤细胞生产服务介绍

xiaoqin

单克隆抗体与常规的血清抗体不同，血清抗体是针对许多抗原决定簇的抗体的混合体，是由多克隆细胞所产生的。而单克隆抗体是由一个骨髓瘤细胞与一个具有分泌抗体能力的B细胞融合形成的杂交瘤细胞，由这一细胞系分泌的抗体。

     杂交瘤细胞的筛选原理

    细胞的DNA合成有主要生物合成途径和补救途径。

    主要生物合成途径就是利用谷氨酰胺（Gln）或单磷酸尿苷酸（UMP）在二氢叶酸还原酶的催化下合成DNA；

    补救途径则利用次黄嘌呤或胸腺嘧啶脱氧核苷在次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（HGPRT）或胸腺嘧啶脱氧核苷激酶（TK）的催化作用下补救合成DNA。

    HAT培养基包括次黄嘌呤+氨基喋呤+胸腺嘧啶脱氧核苷，氨基喋呤是二氢叶酸还原酶的抑制剂，因此能有效地阻断DNA合成的主要合成途径。一般细胞DNA的主要生物合成途径被氨基喋呤阻断后，仍然可以通过补救途径进行合成。如果这时候给细胞提供胸腺嘧啶脱氧核苷和次黄嘌呤，在TK和HGPRT酶的存在下，DNA的合成仍然可以发生，但如果缺少其中一种酶，DNA合成就不能发生。

    用于细胞融合的骨髓瘤细胞系是经过药物诱导的代谢缺陷型细胞，所以细胞内缺少TK或HGPRT酶。当氨基喋呤存在时，能够阻断DNA合成的主要途径，因此要通过补偿途径合成DNA，但是因为使用的骨髓瘤细胞和其自身融合物缺乏HGPRT酶或者TK酶，在HAT培养液中迅速死亡；免疫脾细胞及其融合物虽然有HGPRT酶和TK酶，但是一种短命的细胞，在培养液中不能生长繁殖，一般在5～7天内死亡；只有骨髓瘤细胞与免疫脾细胞融合的杂交瘤细胞既获得了骨髓瘤细胞所具有的永生化且繁殖力极强的特征，同时又从免疫脾细胞得到功能性HGPRT酶和TK酶的基因产物，因此，这种杂交瘤细胞在HAT选择培养液中生长繁殖。

杂交瘤细胞培养及抗体生产服务介绍：

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