杂交瘤测序和抗体测序的区别：流程、意义及应用方面全解析

xiaoqin

在杂交瘤细胞制备的过程中，经过单克隆筛选后，杂交瘤细胞应尽快冻存，但杂交瘤细胞在冻存过程中有丢失高特异性高活性的风险，或者细胞状态不好乃至死亡。为了解决这个问题，可以对筛选得到的杂交瘤细胞进行测序。

杂交瘤测序意义：经过杂交瘤测序，可以获得相应的序列，在以后项目中有需要用到单克隆抗体的时候，可以利用测得的基因序列进行重组抗体的制备。解决了杂交瘤保存过程中，细胞死亡或高特异性丢失的问题。杂交瘤测序，对于进一步的大规模生产及抗体的人源化等生物工程操作同样具有重要的意义。

杂交瘤测序的常规流程：

● 杂交瘤细胞RNA抽提

● 5’RACE反转录

● cDNAPCR获得抗体重链/轻链可变区基因

● 重链及轻链可变区基因克隆测序

● 生物信息学分析测序结果，剔除非功能抗体基因

● 得到抗体序列

杂交瘤测序优势：相较于直接对抗体进行基于蛋白质分析的测序相比，得益于基因测序技术的发展，杂交瘤测序可以提供更准确更可靠的结果，防止蛋白测序中如亮氨酸/异亮氨酸较难区分等潜在风险。

杂交瘤测序的应用：为申请保护性专利提供有权单抗序列信息永久保留单克隆抗体序列信息，防止杂交瘤细胞丢失单抗信息表达纯度更高的重组单克隆抗体缩短杂交瘤细胞克隆化耗时过程，加速单克隆抗体产生速度构建工程化抗体亲和力成熟，进一步提高单抗的亲和力构建嵌合抗体或人源化抗体。

    什么是抗体测序技术?

    其实抗体测序技术的原理和我们上面说的一样，就是通过对抗体蛋白进行从头到尾的测序。通过多酶解技术，通过高分辨率质谱和独特的数据分析的方式来进行相关序列的检测。其原理为通过测量串联质谱中两个片段离子之间的质量差来确定蛋白氨基酸残基的质量，然后沿着蛋白的主链来确定每个氨基酸，最终得到氨基酸的完整序列的方式。

    抗体测序的主要流程是什么?

    1、全序列覆盖

    在通过如上方法进行抗体测序的时候，需要确保每个点位的氨基酸有超过10中不同的肽段支持，在对氨基酸进行质量控制，确保每个质谱里都有强离子片段峰证据。这样，才能保证其全序列覆盖;

    2、抗体质量核对

    对轻重链进行质量测定，确保其在范围内，以确保组装的抗体序列;

    3、亮氨酸和异亮氨基酸确定

    亮氨酸和异亮氨酸的残基通常是无法区分的，但是却又容易造成其亲和力出现偏差的情况。所以，我们在进行相关测试的时候，可以使用一种集成的策略，通过同源性数据统计的方式，明确区分亮氨酸和异亮氨酸;

    其实抗体测序的原理并不复杂，但是，很多用户在自行进行相关测序的时候，往往会出现这样或那样的问题，最终造成结果偏差的情况。总的来说，主要是一些细节方面的问题，只要将这些方面的做好，测序则完全不是问题。义翘神州专业为广大用户提供抗体制备、蛋白表达以及抗体测序服务，如果您有相关需求，欢迎来电咨询。

来源：https://cn.sinobiological.com/services/hybridoma-sequencing-service