重组基因表达制备抗体的原理——义翘重组抗体表达服务介绍

xiaoqin

凭借在分子生物学和细胞工程方面的丰富经验，义翘神州可提供高质量的重组抗体表达服务，以支持药物发现研究进程的各种应用，包括高通量筛选(throughput screening，HTS)，体外活性和功能测定，体内动物研究。义翘神州已具有完善的四大表达平台：哺乳动物表达平台，原核表达平台，酵母表达平台和昆虫表达平台。

义翘神州：https://cn.sinobiological.com/ 拥有专利的GenSmart TM 密码子优化平台，擅长重组抗体（human，mouse和rabbit IgG）的序列和载体设计。此外，义翘神州使用改进的哺乳动物瞬时表达技术，对表达方案及培养基进行持续优化以提高抗体产量（高达3g/L），充分保证克级重组蛋白表达项目的成功交付。

除了单克隆抗体，片段抗体外，义翘神州对于双特异性抗体，融合蛋白等难度分子的重组蛋白表达已深耕多年，成功交付数百个难度分子项目，符合工艺开发的行业标准且满足客户预期。

重组抗体表达服务：https://cn.sinobiological.com/services/recombinant-antibody-production-service

常见问题解析

1.如何提高抗体的稳定性？

优化洗脱条件，可以从高的PH逐渐降低；纯化的样品要及时中和，甚至一边纯化一边中和；纯化实验过程中样品低温制备和保存；添加蛋白保护剂比如甘油、吐温；抗体浓度较高时需要及时稀释，避免高浓度聚沉的风险。

2.如果用哺乳体系进行表达的话，选择293或cho有什么区别？

CHO细胞即中国仓鼠卵巢细胞，是目前表达外源蛋白最多最成功的细胞之一。该细胞属于成纤维细胞，是一种非分泌型细胞，自身很少分泌内源蛋白，因此有利于目的蛋白的纯化分离；相较于其他细胞类型，CHO细胞是治疗性蛋白生产的主要宿主细胞的原因如下：

（1）能在化学成分限定和无血清悬浮培养中稳定生长，

（2）该细胞基因组信息明确，在人类致病病毒应答方面表现出合理的安全性，

（3）能够表达与人相似的翻译后修饰。

此外，CHO细胞表达系统的最重要优势之一是能够容易的得到基因改造的细胞。然而，因为糖基化模式与人类不完全相同，导至CHO细胞产生的重组蛋白在某些时候仍然表现出免疫原性。

HEK293细胞是真核蛋白表达常用的细胞之一，它具有以下优势： 更快的生长速度，更高的生长密度、转染效率高，表达后修饰更接近人体蛋白的结构，可能会有潜在的人病毒污染。

3.义翘神州表达重组抗体服务的优势是什么？

可变区和高变区：

(1)基于生物信息学的氨基酸序列分析，

(2)基于结构生物学的同源建模以及计算机辅助设计和抗体改造

(3)基于空间结构的序列分析的重要氨基酸的回复突变

恒定区：

重链、轻链载体骨架，人源、鼠源多物种可供选择。

丰富的载体表达哺乳动物抗体恒定区。

4.重组抗体的载体如何选择？

重组抗体表达载体和细胞最好是配套的，比如293T细胞对应PCDNA3.1载体，有EBNA改造的细胞对应有Orip复制起点的载体，还有就标准细胞株和标准质粒，例如Thermo的293F对应PCDNA3.4载体等。

5.如何提高重组抗体的产量？

选择高表达系统，制备无内毒素、高超螺旋质粒，细胞状态要好，时间允许可以表达优化，延长表达时间，提高纯化得率。

6.表达的重组抗体是否具有活性？

真核表达系统较原核表达的优势就是活性较好，理论上大部分都是有活性的，但是不同的样品稳定性不一样，需要以实际实验结果为准。

7.是否能高通量筛选重组抗体？

可以做高通量抗体表达及筛选，利用深孔板震荡仪培养，一次可以做大量的表达，可以通过ELISA效价检测筛选，可以通过微量纯化获得20-50ug抗体。