生物活性物质的产生依赖于符合要求的细胞系,然而构建一个有效的细胞系是一件复杂而费时的工作。义翘神州作为专业的生物医药研发服务机构,拥有一系列稳定细胞系构建技术及哺乳动物细胞培养经验,我们整合所有的实验步骤,提供从基因序列到稳定株交付的一站式服务。 义翘优势: 提供瞬时表达评估: 我们能将目的基因克隆入专为TGE系统所设计的高效表达载体中,通过安必奇的瞬时基因表达及蛋白生产业务,可在在4-5周内,为您提供毫克/克级的重组蛋白。 稳定细胞系构建服务是什么 我们提供从稳定细胞系构建至重组蛋白生产的服务,满足客户不同的需求; 提供多种不同的表达载体: 通过2A、IRES、多启动子、融合表达等手段,在一个质粒里实现同时表达两个或者两个以上基因。同时,还可以选择多种启动子、报告基因和亲和标签。 多种细胞株成功构建经验: 在H1299、2F-2B、4T1、786-O、9607、THP-1 、MCF7/ADR 、A549 、 V79 、CHO、 HepG2 等多个种属细胞中成功构建过表达和RNAi稳转细胞系。 构建稳定细胞株常用2种方法
1、转染质粒后,单克隆方法筛选稳定细胞系
对大多数细胞转染效率较低。对于基因过表达,如果转染效率达到40%,基因过表达尚可。但是对于基因干扰实验,对转染效率要求远远高于基因过表达,通常质粒转染无法满足。
另外,质粒游离于细胞质中,很快降解,无法满足较长时间的检测项目;质粒转染整合几率极低,稳定细胞株构建耗时耗力,且得率很低,往往需要挑取单克隆株。
2、病毒感染筛选稳定细胞株
病毒感染方法较质粒转染筛选单克隆方法更方便和高效,是目前主流的稳定细胞系筛选方法。用慢病毒制备稳转细胞株,由于其高效整合、高效转录、高效表达、宿主范围广,感染效率高,且与细胞染色体整合而不发生基因重排,是制备稳定细胞株的理想载体。
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