宫颈癌（CC）是全球女性癌症死亡的第四大原因。宫颈癌筛查正在从传统细胞学逐渐转向高危HPV检测。高危型人乳头瘤病毒（HR-HPV）检测灵敏度很高，但在识别有进展风险的女性方面缺乏特异性，HPV阳性并不等于一定有高级别病变，也难以识别真正有进展风险的女性。如果所有HR-HPV阳性女性都转诊阴道镜，就会造成过度活检、医疗成本增加和患者焦虑。因此需要更客观、可重复、适合高通量平台的分子标志物来对HPV阳性女性进行风险分层。 近日，一组来自哥伦比亚的研究团队在杂志British Journal of Cancer上发表了一篇题为“Identification of microRNAs as biomarkers for triage of cervical intraepithelial neoplasia in cervical scrape samples from high-risk HPV-positive women”的文章。作者使用HR-HPV阳性女性的宫颈刮片样本，通过small RNA-seq筛选不同级别CIN病变相关miRNA，再用独立样本RT-qPCR验证，最终提出 hsa-miR-501-3p、hsa-miR-9-5p和hsa-miR-1271-5p三个miRNA组成的panel，可用于区分低级别/无病变与CIN2/3高级别病变，作为在不增加额外侵入性操作的基础上进行患者分流的策略。
图片来源：British Journal of Cancer 研究设计 此研究旨在为将miRNA分析纳入现有的筛查与分诊框架提供证据，推动实现对高危宫颈病变更精准、客观的早期检测策略。作者专门纳入了HR-HPV阳性女性，并按组织学结果分为低级别/无病变组和高级别病变组。研究为横断面设计，样本来自哥伦比亚国家癌症研究所2010–2012年招募的一个既往队列。发现集包括71例样本，34例≤CIN1，37例CIN2/3。独立qPCR验证集包括30例样本，20例CIN1，10例CIN2/3。宫颈样本采用常规采集方式，在阴道镜检查前，用无菌宫颈刷在宫颈区旋转360°获取细胞，随后将刷子放入RNA裂解液并低温保存。作者分析了HR-HPV阳性、低级别和高级别病变女性的宫颈刮片样本中的miRNA表达谱，旨在识别具有潜在价值的miRNA，作为改善宫颈癌前病变分诊与早期检测的生物标志物。
研究工作流程示意图 图片来源：British Journal of Cancer 与宫颈病变分级相关的差异表达miRNA 经过质量控制后，发现队列中7个样本被排除，最终分析集为64例样本，包括33例CIN2/3和31例≤CIN1，最终保留717个miRNA用于下游分析。差异表达分析最终识别出19个差异miRNA，其中12个在CIN2/3中上调，7个下调（图a）。19个差异miRNA大体可以把样本分成两个主要簇，一个主要由CIN2/3组成，另一个主要由≤CIN1组成（图b）。 上调miRNA包括hsa-miR-1271-5p、hsa-miR-9-5p、hsa-miR-501-3p、hsa-miR-221-5p、hsa-miR-99a-5p、hsa-miR-1246、hsa-miR-4662a-5p、hsa-miR-96-5p、hsa-miR-3690、hsa-miR-184、hsa-miR-99b-5p和hsa-miR-6510-3p。下调miRNA包括hsa-miR-422a、hsa-miR-193b-5p、hsa-miR-29b-2-5p、hsa-miR-365a-5p、hsa-miR-210-3p、hsa-miR-320b和hsa-miR-5100。其中hsa-miR-1271-5p fold change最高，为7.87，校正后p值为5.50E-05。
与宫颈病变分级相关的差异表达miRNA 图片来源：British Journal of Cancer 差异miRNA的进一步筛选 作者分析了两个独立的公共数据集GSE104758和GSE167858，以此来评估研究结果的可重复性。结果显示，hsa-miR-1246、hsa-miR-9-5p、hsa-miR-184和hsa-miR-99a-5p在公共数据集中表现出与本队列一致的表达模式。作者认为，这强化了这些miRNA作为HPV阳性女性高级别宫颈病变标志物的潜力，也支持其跨独立队列的稳定性。 K-means无监督聚类显示，8个miRNA对样本分层贡献最大，包括 hsa-miR-1271-5p、hsa-miR-9-5p、hsa-miR-501-3p、hsa-miR-1246、hsa-miR-4662a-5p、hsa-miR-3690、hsa-miR-6510-3p和hsa-miR-184。基于这8个miRNA的聚类在主成分空间中形成两个趋势性群体，一个更偏CIN2/3，一个更偏无病变/CIN1，但仍存在明显重叠，尤其是CIN2样本（图a）。 作者还用ROC评估了单个miRNA诊断表现。结果显示，在发现阶段，只有 hsa-miR-1271-5p和hsa-miR-6510-3p 的AUC超过0.60并达到统计显著。hsa-miR-1271-5p的AUC为0.710，敏感性78%，特异性68%；hsa-miR-6510-3p的AUC为0.660，敏感性63%，特异性52%。
基于miRNA表达的宫颈病变样本K-means聚类 图片来源：British Journal of Cancer miR-1271-5p与高级别病变显著相关 作者还做了单因素逻辑回归，评估临床变量和miRNA表达与CIN2/3的关系。结果显示，两类变量与高级别病变显著相关。一是激素避孕药使用，OR为5.20。二是hsa-miR-1271-5p表达，OR为1.252。这说明miR-1271-5p不仅在组间表达升高，也能在统计模型中与CIN2/3风险相关。 独立验证集验证结果，miR-501-3p是最佳单标志物，三联panel表现更好 作者在独立验证集进行了RT-qPCR。hsa-miR-4662a-5p由于13个样本Ct未检出被排除。hsa-miR-1271-5p、hsa-miR-501-3p和hsa-miR-9-5p在CIN2+中表达显著高于CIN1，而hsa-miR-99a-5p没有显著差异。按CIN1、CIN2、CIN3进一步分层时，hsa-miR-501-3p和hsa-miR-9-5p在CIN1到CIN3之间表达变化更明显，可能更适合识别高级别癌前改变。hsa-miR-1271-5p则主要在CIN1和CIN2之间有差异，但CIN1和CIN3之间不显著，可能更偏早期进展相关。 ROC结果显示（如下图），hsa-miR-501-3p是最佳单一标志物，AUC为0.8825，hsa-miR-9-5p的AUC为0.7800，hsa-miR-1271-5p的AUC为0.7100。将 hsa-miR-501-3p、hsa-miR-9-5p和hsa-miR-1271-5p联合后，三联panel的AUC可达0.94，敏感性和特异性均达到90%。
独立验证集中的验证结果 图片来源：British Journal of Cancer 这篇文章提出了一种基于宫颈刮片miRNA表达的HR-HPV阳性女性分流策略。作者在HR-HPV阳性宫颈刮片中进行≤CIN1和CIN2/3病变的small RNA-seq，发现19个差异miRNA，其中12个在高级别病变中上调、7个下调。随后通过聚类、ROC、逻辑回归、外部数据集复现和RT-qPCR验证，筛选出hsa-miR-501-3p、hsa-miR-9-5p和hsa-miR-1271-5p作为候选分流标志物。hsa-miR-501-3p是最佳单标志物，AUC约0.88，三联panel AUC达到0.94，敏感性和特异性均为90%。 不过，这项研究仍应定位为早期候选标志物发现与初步验证。未来最关键的问题包括更大规模多中心的前瞻性验证。其次还要纳入不同HPV基因型和不同年龄段人群。还需明确液基细胞学保存液中的检测稳定性，并与现有HPV16/18分型、细胞学、p16/Ki-67双染和DNA甲基化分流策略直接比较。总体而言，这一miRNA panel可作为HR-HPV阳性之后的二级分流检测。表达谱提示高级别病变风险者优先转诊阴道镜，低风险者继续常规随访，从而减少不必要操作并优化医疗资源配置。 注：本文内容仅供行业动态参考，不构成任何投资建议或临床医疗决策依据。 |
浙公网安备33010802005999号 
