Wehelp 2× Golden Taqman Mixture

wehelpinc · 发表于 2017-3-7 14:19

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包装量：1ml

浓度：2×

颜色：无色溶液

储存条件

于-20℃下储存，在合理储存方法下可稳定保存6个月。

产品描述

Wehelp (Golden) Taqman Mixture是专用于探针法（Taqman）实时荧光定量 PCR的预混体系，浓度为2×，包含(Golden) Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs和Mg2+。配制好的预混合液操作简单便捷、能有效缩短操作时间，减少移液过程中混入的污染。本制品主要对靶基因进行准确定量、检测，使用该类产品可以得到更广的线性范围，对目的基因定量更为准确。且适用于不同类型探针法荧光定量，重复性好，可信度高。

Molebio-003使用的热启动酶Golden Taq DNA Polymerase在常温下没有聚合酶活性，有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，能显著提高扩增效率，PCR反应的灵敏度更高、特异性更强。

优点

Ø 适用于实时荧光定量PCR反应，能快速、准确地对目的基因进行检测、定量。

Ø 是一种PCR预混合体系，操作简单方便。

Ø Molebio-002、Molebio-003中分别使用了Taq DNA Polymerase、Golden Taq DNA Polymerase与Wehelp独特改良配制的PCR缓冲体系相混合，具有高扩增效率、高扩增灵敏度之特点。

注意事项

Ø -20℃保存，避免污染。

Ø 避免反复冻融，反复冻融可能使产品性能下降。

Ø 使用前，需上下轻轻颠倒混匀，经短暂离心后使用。若试剂没有混匀，其反应性能有所下降。

Ø 融解后的试剂请于冰上放置。

Ø 反应液的配制、分装请使用无污染的枪头、离心管等，避免污染。

Ø 本制品中不含有探针。

Ø 本产品未添加ROX校正染料。

Ø Ø 在荧光定量PCR仪上进行实时PCR，并在退火或延伸步骤记录荧光信号。

使用指导

1、PCR反应体系

试剂	50 μl 反应体系	终浓度
2× (Golden) Taqman Mixture	25 μl	1×
10 μM Forward Primer	1 μl	0.2 μM (0.05-1 μM)
10 μM Reverse Primer	1 μl	0.2 μM (0.05-1 μM)
10 μM Probe	1 μl	0.2 μM (0.05-1 μM)
Template DNA	5 μl
ddH2O	to 50 μl

2、PCR循环反应条件

步骤	循环次数	温度	时间
1	1	96℃	2分
2	35~40	94℃	10 秒
2	35~40	56~64℃ (信号采集点)	45~60 秒

注意：为抑制非特异性反应，Molebio-003中添加了抗Taq DNA多聚酶的单克隆抗体进行热启动。此方法的优点是酶活力的释放极快，在2分钟内即可完成预变性。各循环的变性步骤只需考虑核酸变性所需的时间进行设定即可。如果使用LightCyclerTM等高速 PCR仪，更能显示出其缩短时间的优越性。

反应条件优化

u 引物终浓度：一般以0.2 μM 为引物最佳浓度。在反应性能较差时，可以 0.1～1.0 μM 作为引物浓度的参考范围。

u 探针浓度：与使用的 Real Time PCR 扩增仪、探针种类、荧光标记物质种类均有关，使用时需参照仪器说明书或各荧光探针的具体使用要求进行。

u 模板添加量：随着模板溶液中存在的靶基因的拷贝数不同而不同，通常模板添加量为100 ng 以下，也可进行梯度稀释以确定最佳模板添加量。

u ROX校正：因不同扩增仪的激发光学系统不同，需根据各荧光定量仪器正确选择ROX校正。

建议采用两步法PCR反应程序，若因引物Tm值较低等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增。