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[分享] 细胞计数方法漫谈

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发表于 2016-1-10 22:40 | 显示全部楼层 |阅读模式

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“12345,上山打老虎”这是毛博小时候经常唱的一首童谣,也教会了我怎么数数字。这项技能很重要,多年以后毛博远渡重洋,在米国实验室打工的时候还要经常用到这项技能,那就是细胞计数吧。其实,细胞计数最关键的不是计数,而是计数活细胞。因为在那一大堆细胞里面,肯定有死有活的,只有活的才对我们的实验有意义,是吧?所以,细胞计数最关键的就是首先要鉴别细胞的死活。

细胞计数的实验用品非常非常简单,都是任何一家实验室常备的:0.4%台盼蓝溶液、95%乙醇溶液、普通显微镜、试管、吸管、细胞计数板、绸布。这里的台盼蓝就是用来鉴别细胞死活的。台盼蓝又称为活体染料,不能透过活细胞正常完整的细胞膜,故活细胞不会染上任何颜色。而死亡细胞的细胞膜通透性增高,可使染料进入细胞内而使细胞染上蓝色。

细胞计数的具体步骤如下:
  1.计数板处理

用95%乙醇溶液把计数板使劲地擦擦擦后,再用绸布擦干净,再拿一张盖玻片,也用绸布擦干净。最后把盖玻片覆盖在计数板上面。

2.制备细胞悬液

将细胞用生理盐水制备成适当浓度的细胞悬液。再向计数板滴一滴。向计数板中滴细胞悬液时要干净利落,量要适当,过多易使盖片漂移,或淹过盖片,过少则容易出现气泡。这样多算失败。重头再来吧。

3.染色

按与细胞悬液1∶1的比例,用滴管吸取0.4%台盼蓝染液,从计数板边缘缓缓滴入,使之充满计数板和盖片之间的空隙中。不要使台盼蓝染液流到旁边的凹槽中或带有气泡,否则也算失败哈!要重做滴。稍候片刻,将计数板放在低倍镜下(10倍即可)观察计数。
  
  4.计数方法

计算计数板的四角大方格内的细胞数。如下图所示,只计数A、B、C、D这四个大格子里面的细胞哈。计数时,只计数活细胞。镜下观察,凡是亮晶晶的不着色的透明的为活细胞,凡是染上蓝色者为死细胞。若聚成一团的细胞,则只算一个细胞哈。在一个大方格中,如果有细胞位于线上,按照“计下不计上;计左不计右”的原则,即“计下线细胞不计上线细胞,计左线细胞不计右线细胞”。如果不放心的话,可以重复计数2-3次,算一个平均值即可。

5.计数的换算

计完数后,需换算出每ml细胞悬液中的细胞数。 每一大方格内细胞数×10,000=细胞数/ml,故可按下式计算:细胞悬液的浓度=细胞数/ml=4个大格细胞总数/4×10,000。如计数前已稀释,可再乘稀释倍数。
 
  好了,计数完毕,打完收工。大家也可以看到,细胞计数不是什么高大上的技术。但是,还是一个非常常用的技术。因为任何涉及到细胞计数的实验,首先就是要确定细胞的浓度和数量。现在有细胞计数仪。可以代替人工细胞计数。不过说句实话,一般不是土豪实验室的话,都没有配备。毛博当年在米国做博士猴的时候,也是用以上的方法人工计数的。人工计数的准确性一点不比细胞计数仪差,而且时间短,费用低,就算是穷人实验室的小米加步枪,效果也不一定比土豪实验室的飞机大炮差。

来源: 解螺旋

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发表于 2017-2-21 08:56 | 显示全部楼层
血液细胞分析仪是医院临床检验应用非常广泛的仪器之一,最初的计数细胞的原理是利用电阻抗原理,即血球悬浮在电解液中,用一定的电流通过传感器的内外两个电极,由于血细胞电阻抗很大,当血细胞通过两个电极时,电极间阻抗瞬间增大,形成幅度与血细胞体积成正比的电脉冲,根据脉冲的大小可测出细胞的体积。现在的全自动分析仪主要是以电阻法为基础,联合高频电导和激光散射法,使细胞分类更多更详细,以满足临床。
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发表于 2017-8-19 09:13 | 显示全部楼层
好好学习一下
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