立即注册找回密码

QQ登录

只需一步,快速开始

微信登录

微信扫一扫,快速登录

手机动态码快速登录

手机号快速注册登录

搜索

图文播报

查看: 32694|回复: 1

[分享] 贝克曼化学发光测定的影响因素之钩状效应(HOOK效应)

[复制链接]
发表于 2015-3-5 23:45 | 显示全部楼层 |阅读模式

登陆有奖并可浏览互动!

您需要 登录 才可以下载或查看,没有账号?立即注册 微信登录 手机动态码快速登录

×
钩状效应即HOOK效应,是指由于抗原抗体比例不合适而导至假阴性的现象,其中抗体过量叫做前带效应;抗原过量叫做后带效应。

抗原抗体特异性反应时,生成结合物的量与反应物的浓度有关。无论在一定量的抗体中加入不同量的抗原或在一定量的抗原中加入不同量的抗体, 均可发现只有在两者分子比例合适时才出现最强的抗原-抗体反应。以沉淀反应为例,若向一排试管中加入一定量的抗体,然后依次向各管中加入递增量的相应可溶性抗原,根据所形成的沉淀物及抗原抗体的比例关系可绘制出反应曲线(图):

                                 前带、后带效应
从图中可见,曲线的高峰部分是抗原抗体分子比例合适的范围,称为抗原抗体反应的等价带(zone of equivalence)。在此范围内,抗原抗体充分结合,形成的沉淀物最多,表明抗原与抗体浓度的比例最为合适,称为最适比(optimalratio)。在等价带前后分别为抗体、抗原过剩则影响沉淀物的形成,这种现象称为带现象(zone phenomenon)。带现象在临床检验中经常出现,特别是ELISA反应中。出现在抗体过量时,称为前带(prezone),出现在抗原过剩时,称为后带(postzone)。所以在临床工作中一定要注意前带和后带现象,以免出现假阴性结果,尤其以前带效应明显。
如何判断及解决钩状效应?
免疫测定的实质是抗原抗体反应,抗原抗体反应是按一定的分子比例结合,当二者比例适中时,形成的免疫反应最强烈,形成复合物或检测的信号与所测的抗原或抗体成比例关系,但当抗原或抗体其中一者过量时,免疫反应将减弱,测定值呈现假性低值。

在化学发光中像二步分析法一般都能避免钩状效应,对于一步夹心法项目说明书中都提到了产生钩状效应的上限如人绒毛膜促性腺激素的钩状效应值是100万mIU/ml.在实际工作中如遇到测定值与临床严重不符的结果要考虑到钩状效应,解决办法是稀释此样本。一步夹心法产生的钩状效应主要是抗原分子量的因素造成的,故采取稀释的方法是最可取的,但要注意稀释的方法和稀释液的选择。


以下引用(引自国际检验医学杂志)两例AFP实际发生的病例以帮助更好的理解(钩状效应即HOOK效应)
近十年来通过不断改进和发展,使化学发光免疫分析成为非放射标记免疫分析中最有前途的方法之一。测定时间短,无放射污染等特点,广泛应用在临床和科研。甲胎蛋白(AFP)是一种胚胎发育早期的高浓度血清糖蛋白,是早期诊断原发性肝细胞癌的特异性标志物,亦可用于妊娠时唐氏综合症的筛查及原发性肝细胞癌的预后判断和治疗检测。

在中国由于巨大的人口数量和较高的乙型肝炎病毒(HBV)感染率,原发性肝细胞癌的发病患者数约占世界的55%,死亡率为20.4/10万。因此,准确测定AFP一直受到临床医生的关注。然而,只要是抗原抗体反应的原理,就有可能出现“钩状”效应,就有可能因为抗原抗体比例不合适而导至测定结果低于实际含量或出现假阴性的现象。现将用微粒子化学发光(CMIA)检测AFP出现钩状效应导至结果低于实际含量的情况报道如下。
1 资料与方法
1.1一般资料(1)2013年2月2日湖北省天门市第一人民医院介入科46岁男性患者,因肝恶性肿瘤介入治疗后1月入院,诊断为肝恶性及乙型病毒肝炎。(2)2013年3月22日湖北省天门市第一人民医院介入科22岁男性患者,因肝恶性肿瘤介入术后2月余及呕血入院,诊断为肝恶性肿瘤伴门静脉、肝静脉、下腔静脉转移;腹水;上消化道出血;慢性乙型病毒性肝炎。

1.2  检测方法  (1)仪器:贝克曼UniCel DxI800全自动化学发光免疫分析仪;(2)试剂:贝克曼UniCel DxI800仪器配套AFP定量检测试剂盒(批号:224751);(3)校准品:贝克曼UniCel DxI800仪器定量检测校准品(批号:224750);(4)质控品:英国朗道质控品,水平2(批号:670UN)。所用试剂及校准品均在有效期内新开瓶使用,开机质控在控,批量进行标本检测。
2  结果
仪器检测46岁男性患者AFP的原始结果为1566.3ng/mL(该仪器的检测AFP的上限值为3000ng/mL),对比LIS系统中该患者最近两次(同年1月4日,去年11月25日)AFP历史结果分别为882625ng/mL(原始结果为2987.2ng/mL,将原始标本进行稀释复测所得)和477225ng/mL(1000倍稀释后)。笔者对原始标本进行稀释复测,经过1000倍稀释后结果为1092700ng/mL。

仪器检测22岁男性患者AFP的原始结果为2945.9ng/mL,对比LIS系统中该患者最近一次(同年1月2日)AFP历史结果分别为854400ng/mL(原始结果为2053.4ng/mL,将原始标本进行稀释复测所得).。笔者对原始标本进行稀释复测,经过1000倍稀释后结果为1189710ng/mL。
3  讨论
自2011年7月份起,本科室就引进了贝克曼UniCel DxI800全自动化学发光免疫分析仪进行肿瘤标志物的检测。由于肝癌患者AFP>3000ng/mL的情况特别多,因此常需要进一步稀释样本后才能检测出准确的结果,但检测过程中因发生“钩状效应”而导至测定结果低于实际含量或出现假阴性的情况非常少见。以上1位患者的第一次历史结果,仪器检测原始值大定量检测于>3000ng/mL,经过进一步稀释后即可得出准确结果而未发生“钩状”效应。

在贝克曼UniCel DxI800全自动化学发光免疫分析仪AFP的试剂说明书中指出,AFP含量未达到500000ng/mL时,AFP测定不会表现出“钩状”效应。这说明,超过这一浓度的标本就有可能表现出“钩状”效应,也就需要我们检测者结合自身经验及临床诊断做出准确判断后对标本进行稀释后复测。目前笔者还未在AFP含量小于500000ng/mL的临床标本中发现存在的“钩状”效应。

AFP作为一种最经典的肿瘤标志物,其检测结果一直受到临床医生的重视和患者的高度关注,很多单位和个人都将其作为健康体检的一种常规项目,而有肝病史的人群更关心其定量测定的结果,其检测结果的稳定性和准确性与患者的利益密切相关,假阳性结果会引起人们的过度恐慌和不安,假阴性或低于实际含量的结果会给临床医生或患者错误的提示,延误治疗或影响疗效判断。

因此,作为检验工作者一定要加强责任心,要在平时的工作中不断总结,不断积累经验,不能盲目相信仪器所检测的结果。对一些有疑问的结果要及时跟临床医生进行沟通并结合患者的病情及临床其他检查结果综合起来分析、讨论、有必要时对原始标本进行原液复测及稀释后复测。避免因“钩状”效应或其他原因导至检验结果的错误或误报。

楼主热帖
回复

使用道具 举报

发表于 2017-9-20 21:21 | 显示全部楼层
认真学习了
回复 支持 反对

使用道具 举报

发表回复

您需要登录后才可以回帖 登录 | 立即注册 微信登录 手机动态码快速登录

本版积分规则

关闭

官方推荐 上一条 /3 下一条

快速回复 返回列表 客服中心 搜索 官方QQ群 洽谈合作
快速回复返回顶部 返回列表