B·R·A·H·M·S PCT产品检测病人样品检测结果的溯源性（2）

四、B·R·A·H·M·S PCT LIA校准品对于参考物质的溯源性

1、B·R·A·H·M·S标准物质的发展

B·R·A·H·M·S公司开始形成第一代降钙素原产品时，公司人工合成了第一个自己的降钙素原的参考物质PTN47。该物质由47个氨基酸组成。确定某一批的PTN 47为准，成为公司的降钙素原的最高级校准品。并将另一批的PTN47作为公司产品校准品，以最高级校准品为准，通过病人标本比对，确定产品校准品与某批号检测产品组合下的校准值。与公司该批号产品一起销售给临床实验室。

在使用PTN47为参考标准时，公司考虑到它仅是完整分子的一个多肽。所以，在配制标准液时，按照多肽与完整分子的比率多称了PTN47，期望给予纠正多肽不长的补偿。当时，将PTN-47形成的校准体系，称为“Urstandard PTN-47”，意即“金标准PTN-47”。

但是，PTN47仅为47个氨基酸的多肽，在参与免疫检测反应中检测信号较微弱。为此，以后公司又合成了一个第二个降钙素原的115个氨基酸多肽，称为PCT 115参考物质。

由于PCT115参与免疫反应的能力增强，与PTN47校准的检测产品间的结果有很大的差异。为了确保公司任何一代产品对相同病人样品检测降钙素原结果的一致，也与以往PTN47校准的产品对病人检测结果的一致，公司均以PTN 47校准的B·R·A·H·M·S PCT LIA为准。

为了确保所有各代产品以后对病人样品检测结果的一致。首先必须完成由PTN-47与B·R·A·H·M·S PCT LIA产品的组合，和PCT115与B·R·A·H·M·SPCT LIA产品的组合间，在对病人样品检测结果一致下，校正PCT115的“标准”值。也即PCT115不可以自身在免疫检测中具有的实际检测值为准，它必须被调整到确保病人检测结果在这两组系统中的一致，以PTN-47与B·R·A·H·M·S PCT LIA产品的组合为准的值。

2、完成PTN47与PCT115交换

实际检测显示的一组标准稀释液（即免疫检测中为形成校准曲线需要的系列标准），在PTN47与PCT115间，在相同的B·R·A·H·M·S PCT LIA产品下的结果比较呈曲线表现。因此，不可应用PTN47所有系列稀释液阅读点的直接校准。

为确保临床检测结果的一致性，使用Urstandard-PTN47与B·R·A·H·M·S PCT LIA产品2h版本校准的，以标准样品S3（2 μg/L）为准。依据S3单点结果，计算出Urstandard-PCT115范围其他标准的系列稀释液的临床显示浓度。以后，公司可以Urstandard-PCT115为准，与B·R·A·H·M·S PCT LIA产品2h版本组合，由PTN47S3为准校正的PCT115，经系列PCT115稀释液去形成在PCT LIA下的校准曲线，对病人样品进行检测。这些病人样品再次在PTN47与B·R·A·H·M·SPCT LIA组合的比较下，证实与PCT115和B·R·A·H·M·S PCT LIA组合的结果比较，符合公司认可的一致性。这样，完成了PTN47与PCT115在B·R·A·H·M·SPCT LIA产品中得到了病人结果一致性的转换。

使用PassingBablok回归分析PTN47与PCT115在B·R·A·H·M·S PCT LIA产品结合的两个方法比较，确定偏移。该方法允许在X和Y变量下得到检测误差，它没有假设检测误差呈正态分布，PassingBablok对于离群点处理非常稳健。使用Passing-Bablok分析显示了，对347例相关血清检测时，与LUMItest PCT 2h-版本在完整的检测范围内具有良好的相关（y = 1.01+0.05）。

在不同浓度范围的有关相关，观察到相关线为非线性表现（斜率下降和在X上的截距上升）。这是因PCT115的较高免疫反应性，被使用S3的单点校准所致。直至100μg/L PCT浓度，平均偏离在检测范围（0~500 μg/L）之内，符合临床要求。在使用PCT115校准与使用PTN47校准比较时，如果PCT浓度大于100 μg/L，观察到患者结果偏低（平均约6%）。（见表1）。

表1 使用PCT115代替PTN47校准引入平均差异

3、校准等级和溯源性流程图

图1 B·R·A·H·M·S PCT LIA检测校准品溯源性等级。

图示的解释

这是B·R·A·H·M·S的PCT产品校准“溯源示意”。

1）图中的右上第一个方块是，以PTN47为准，与B·R·A·H·M·S PCT LIA产品结合，检测了一组病人血清样品，确定了这些血清的PCT检测结果。

2）图中左侧的第一个方块是，将PCT115与对B·R·A·H·M·S PCT LIA产品结合，以上述这批病人样品的检测结果进行校准，使这个组合检测得到的这组病人样品检测结果，与上述的这组病人样品在PTN47与B·R·A·H·M·S PCT LIA组合检测结果一致。实际上是通过方法学比较，调整了PCT 115与B·R·A·H·M·S PCT LIA组合中，PCT115应表达的值。这样确立了PCT 115成为公司的内部的一级校准品地位。（由于B·R·A·H·M·S提供的资料中，没有特别注明所有图示中的PCT 115的区别。因此，需要说明的是，图左侧的最上那个方块内的PCT 115，是公司指定了某批PCT115，作为公司的内部一级（master）标准。图示称为厂商校准品。也即被以后称为的公司的PCT 115金标准。）

3）按照溯源程序，现在到了右侧的的第二块方块。方块中“以B·R·A·H·M·S  PCT LIA相对于金标准PCT115（意即被调整了标示值的PCT115）的组合，去测定每个校准品的浓度。”这段话说明了，以后不论哪个产品型号，它们使用的校准品的“显示”浓度值，都必须在B·R·A·H·M·S PCT LIA与金标准组合下，与任何B·R·A·H·M·S PCT产品型号和产品校准品组合，通过病人标本比对中，去调整产品校准品的值，使之达到两组系统对病人样品检测结果最佳一致。由此确定该校准品在某个B·R·A·H·M·S PCT产品型号某个批号的组合下的定值。形成了左侧第二块内的产品校准品。（同样需要指出的是，这里说的产品校准品，是公司使用的另一批的PCT115。）

4）图中右侧向下的第三个方块，是公司的B·R·A·H·M·S PCT LIA的产品，它与左侧第二个方块内的产品校准品一起，提供给终点用户，即临床实验室。临床实验室对病人血清或血浆进行检测，得到样品的PCT检测结果。然后，该检测结果提供给中间最下方，意即为临床诊断和治疗提供PCT信息。

五、确定标准浓度的控制范围

1、公司内部一级校准品的监视

为了监视公司内部一级校准品的稳定性，要求有一个约两年的老标准范围系列样品（血清）与相应0血清。这些组分必须被储存于≤-15℃。每两年对公司内部一级校准品检查一次，必须对在≤-15℃下储存的10个标准范围样品进行检测。该检测做法按下面第2点实施。

2、检测标准浓度的校准

1）检测操作

至少在两天内至少进行10批间检测，使用以市售的0血清复溶（配置）的检测样品，同时检测内部一级校准品和0-血清的组合、和独立的（与试剂盒无关）的控制血清。所有样品在荧光光度计上检测。可以使用相应的市售组合。

2）按以下顺序进行双份检测：

（1）公司内部一级校准品（标准和控制品）、以0-血清复溶的样品；

（2）至少有4个独立的控制血清（天然混合血清），浓度必须覆盖完整标准范围。

3）监视检测PCT-浓度的要求, 见表2。

表2 检测中检测PCT浓度

6、概要和结论

B·R·A·H·M·S PCT LIA的校准历史覆盖了厂商的检测程序、厂商的校准品、厂商的一般检测程序和厂商的产品校准品。校准品依从了ISO17511的要求。

校准品实际是可溯源的，通过校准品的不间断链，到参考物质PCT115、PTN47标准曲线（2h-版本）的标准样品3（S3）（2μg/L）。