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尿液PCA3基因检测在前列腺癌诊断中的意义!!!

2018-1-18 00:54| 编辑: 小桔灯网| 查看: 2463| 评论: 0|来源: 千麦医疗

摘要: 尿液PCA3基因检测在前列腺癌诊断中的意义 【关键词】DD3基因;RT-PCR;前列腺癌;尿液 近年来临床上前列腺癌的患者明显增多,其诊断指标有血清PSA和前列腺穿刺活检,由于临床上影响PSA升高的因素很多,临床假阳性的 ...

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尿液PCA3基因检测在前列腺癌诊断中的意义

【关键词】  DD3基因;RT-PCR;前列腺癌;尿液

 近年来临床上前列腺癌的患者明显增多,其诊断指标有血清PSA和前列腺穿刺活检,由于临床上影响PSA升高的因素很多,临床假阳性的概率高;其穿刺活检是一种有创性检查,感染和出血的机会大,所以有必要用一种更特异的检测方法来诊断前列腺癌。PCA3是近几年来所发现的一种最佳的前列腺癌特异基因,其表达仅在前列腺上皮细胞,且具有肿瘤特异性。本实验建立在RT-PCR基础上检测尿液中PCA3基因表达情况,以探讨其在前列腺癌诊断中临床意义。
     
1  资料和方法   
1.1  一般资料  
  本院2008—04~2009—08门诊和住院病人中经穿刺活检和术后病理证实为前列腺癌的病人20例,前列腺增生组中病人30例。
     
1.2  主要试剂和仪器   
Trizol,TaqMan Reverse Transcription Reagents ,Rnase抑制剂,Taq DNA聚合酶,50bp和100bpMarker ,琼脂糖,PCR仪,PCR电泳仪,高速台式冷冻离心机TGL-16M,YLN-2000型凝胶影像分析系统,GIS凝胶图像处理系统,电子恒温水浴锅,FA 2004型电子分析天平,微量移液器,低温冰箱。
     
1.3  标本的收集和总RNA的提取   
  (1)取前列腺按摩后的第一次尿液30mL,立即放入冰中冷却。于3000rpm/10min离心收集尿沉渣,加等量冷D-hanks液洗涤两次,放置在-70℃保存备用,按经典总RNA抽屉试剂盒说明书上提取总RNA后真空干燥。用15mL DEPC溶解,取2μL RNA溶液加入98μL水中,混匀后在微量分光光度计上测A260/A280比值及RNA含量。
     
1.4   RT-PCR检测   
  (1)cDNA合成:取11μL RNA模板样品,加入oligo180.5μg/μL,具体操作按逆转录试剂盒说明书进行,总反应体积约20μL,最后取2μL来PCR扩增,(2)PCA3的扩增:在外显子1和3之间设计一对PCA3引物,上游引物TGGGAAGGACCTGATGATACA',下游引物,CCCAGGGATCTCTGTGCTT。   
1.5  统计学分析     
  用SPASS12.0统计软件包对数据进行统计分析。数据分析用t检验。


2、结果   

2.1   尿液PCA3基因表达结果      
  所有标本中均有PSA基因158bp电泳带,前列腺癌患者中见到一特异220bpPCA3电泳带(见图1),其中前列腺增生患者无PCA3基因表达。前列腺癌患者中都表达PCA3mRNA。

        

2.2  DD3mRNA在前列腺癌的诊断中敏感度较高
     
  见表1。表1  PCA3mRNA阳性率和血清PSA浓度大小的关系  

3、讨论      

  前列腺癌是西方国家男性是最常见的恶性肿瘤之一,位于死亡原因中的第2位。目前我国发病率呈上升趋势,前列腺癌诊断最常用的标记物之一是PSA及tPSA,前列腺穿刺活检是诊断前列腺癌的金标准,当血清PSA大于4ng/mL时,前列腺穿刺活检阳性率很低,所以临床上需要一种更特异的标记物来诊断前列腺癌[1]。PCA3基因是1999年bussemakers等[2]发现的一种前列腺癌特异基因,它是一种非编码RNA。该基因特异性表达与前列腺癌细胞,正常前列腺细胞,前列腺增生的细胞中不表达或者仅少量表达,在其他肿瘤组织中不表达。与PSA基因相比,PCA3基因是一个前列腺癌特异性很强的基因。本实验是建立在RT-PCR基础上,检测前列腺癌按摩后尿液中前列腺液PCA3基因的表达进行分析。由于不同标本中含有前列腺细胞数量不均,本实验选择PSA作为管家基因,已经证实PSA基因在正常前列腺细胞表达较恒定[3,4]。前本实验对前列腺按摩后尿液PCA3基因定性分析结果显示:前列腺癌患者尿液PCA3基因表达呈阳性,前列腺增生患者尿液PCA3基因表达为阴性,差异具有统计学意义(P<0.01)。以PSA的不同范围(小于4ng/mL,大于4ng/mL而小于10ng/mL,大于100ng/mL)将前列腺癌和良性前列腺增生患者分成4组,当PSA>10ng/mL时,两者的敏感性差异不大。当血清大于4ng/mL而小于10ng/mL时,PSA不能关鉴别前列腺癌和前列腺增生,tPSA的特异性也只有20%,也不能鉴别前列腺癌和前列腺增生[5];该实验中PCA3基因阳性的有3例,这说明PSA值位于这一灰色区间时,PCA3基因敏感性高于PSA。本次实验在肛诊中发现一例患者前列腺有结节,其PSA<4ng/mL。尿液PCA3基因检测为阳性,这说明PCA3基因检测有可能发现这部份患者。

【参考文献】
   [1]Reynolds MA,Kastury K, Grpskopf J,et al.Molecular markers for prostatecancer[J].Cancer Lerr Feb,2007,249:5[CD*2〗13

  [2]Bussemakers MJ,Van Bokhoven A,Verhaergh GW,et al.DD3:a new prostate-specificgene,highly overexpressed inprostate cancer[J].CancerRes,1999,59:5975[CD*2〗5979

  [3]Tinzl M,Marberger M,Horvath S,et al.DD3PCA3NRA analysis in urine-a newperspective for detecting prostate cancer[J].Eur Urol,2004,46:182[CD*2〗186

  [4]Groskopf J,Aubin SM,Deras IL,et al.APTIMA PCA3molecular urinetest:development of a method to aid in the diagnosis of prostate cancer[J].Clin Chem,2006,52:1089[CD*2〗1095

  [5]Catalona WJ,Partin AW,Slawin KM,et al.Use of the percentage of freeprostate specific antigen to enhance differentiation of prostate caner frombenign prostatic disease;a prospective multicenter clinical[J].JAMA,2007,279:1542+




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