HPV DNA 27分型介绍

宫颈癌仍然是发展中国家女性常见的恶性肿瘤。大量证据表明，同一高危型 HPV 持续感染是宫颈癌发生的必要因素，已确认了 14 种高危 HPV 型别与宫颈癌相关。通过大量临床试验证明，HPV-DNA 检测对 CIN2+诊断有很高的敏感性和阴性预测值，HPV-DNA 检测更适合于宫颈癌初筛。

一、人乳头瘤病毒与宫颈癌

人乳头瘤病毒（human papilloma virus，HPV）是一种嗜上皮性病毒，导至人类多部位上皮的增生性病变。WHO 等权威组织一致确认 HPV 感染是宫颈癌发病的主要病因和必要条件，HPV 因此成为人类癌瘤发病中唯一得到完全确认的致癌病毒。

      2015 年初，美国妇科肿瘤协会（SGO）和美国阴道镜和宫颈病理协会

（ASCCP）联合发布《高危型人乳头状瘤病毒检测（hrHPV）作为初筛方法单独

用于宫颈癌筛查：过渡期临床指导》，新版指南指出：

1.与细胞学初筛相比，HPV 检测初筛具有更高的敏感性和阴性预测值，从而 

延长筛查间期，增加成本效益。

2.与联合筛查相比，HPV 检测初筛具有相似的敏感性，也不降低持续性病变

 的检出率。欧洲和印度的大规模临床试验均证实，HPV 初筛可降低宫颈癌的发 病率和病死率。

3.推荐 HPV 初筛可用于现行宫颈癌筛查的替代方案。

4.HPV 初筛为基础的宫颈癌筛查策略。

 二、宫颈癌筛查新筛查流程

三、中国 HPV 流行病学特点

根据 2014 年 WHO 调查结果，中国宫颈癌 HPV 感染型别前五位分别是 16、18、58、52、33，引发 90%以上的宫颈癌【1】。王诗卓等报道，辽宁省前五的高危型型别为 HPV16、58、18、52、33【2】；方丽娟等报道，江西省前五的高危型型别为 HPV52、16、58、33、53【3】；冯余宽等报道，四川省主要高危型型别为 HPV58、16、52、18 【4】；刘峰等报道，云南省主要高危型型别为 HPV52、16、58、53、33【5】。

从中国各地 HPV 流行病学调查来看，HPV58、52、33 等型别阳性率普遍较高，一般高于 HPV18 型的阳性率，甚至超过 HPV16 型的阳性率。因此，在关注 HPV16/18 型同时，也应该重点关注 HPV58、52、33 等型别。 

四、HPV-DNA 全分型检测的临床应用

1.应用于宫颈癌一线筛查。

2.对细胞学诊断为 ASCUS 阳性的患者进行分流管理，减少不必要的阴道镜检测。

3.联合细胞学检查。

HPV-DNA 全分型检测的意义，因 HPV 不同型别的致病力，进行个性化管理（HPV16/18 型直接进行阴道镜检测，其他高危型通过细胞学进行分流）。特别有助于跟踪随访，区分是相同型别的 HPV 持续感染，还是不同型别的 HPV 反复感染。

大量研究表明，只有两次检测属于同一基因型才能确认是 HPV 持续感染。不同高危型的反复感染患 CIN2/3 的风险比为 192，而相同型持续感染则高达 813【6】。

五、产品信息

基于以上数据，上海透景生命科技股份有限公司研发设计并推出了《人乳头瘤状病毒核酸分型检测试剂盒》，该产品采用流式荧光技术，同时检测 27 种HPV-DNA。该试剂盒获得 CFDA 和 CE 认证。

1.检测原理

本试剂盒采用通用引物多重 PCR 扩增，流式荧光杂交分型检测的方法，同时检测 27 种 HPV DNA。试剂盒共有设置了 2 类探针，28 颗分类微球。其中，与 HPV DNA 杂交的探针包被在 27 个分类微球上，对应型别特异性探针的信号为阳性将被判定为该型别 HPV 阳性。质控微球是与人β球蛋白（β－globin）基因杂交的探针，它的结果提示取样、抽提、PCR 和杂交整个过程是否符合要求。检测时，首先 PCR 扩增待检测样本 DNA，得到的 PCR 产物和微球上交联的探针根据碱基互补配对的原理杂交，加入荧光标记物，最后在多功能流式点阵仪上检测荧光信号。如果 PCR 产物和探针完全配对，则微球上相应探针捕获到标有生物素（Biotin）的 PCR 产物，加入标记了链霉亲合素（StrepAvidin，SA）的藻红蛋白 (R-phycoerythrin ， PE) 后，形成微球 - 探针 -PCR 产物-Biotin-SA-PE复合物，在多功能流式点阵仪上即可检测到分类微球的荧光信号。

如果 PCR 产物与探针不配对，则分类微球的荧光信号为背景信号，所得到的数据经分析后可以直接判断结果。

2.检测流程

3.包装规格

48 人份/盒 480 人份/盒

4.样本要求

宫颈脱落细胞、疣体组织等

5.核心仪器

Luminex 200，FDA 认证

6.完善指控

采用人源β-Globin 基因作为全程内质控，有效监控因采样量不足，提取失败，扩增抑制等带来的假阴性。

7.产品特点

27 种型别，一次呈现

激光分析，数字结果

液相杂交，重复性好

无需洗涤，减少污染

荧光显色，安全无毒

8.流式荧光和膜条杂交的区别

七、参考文献

【1】ICO Informatin Centre on HPV and CancerChina Human Papillomavirus and Related Cancers,Fact Sheet 2014(Dec 15.2014)。

【2】王诗卓等，辽宁地区人乳头瘤病毒的感染状态及其高位基因型的分布情况，中国医科大学学报 2012 年 2 月第 41 卷第 2 期，146-147。

【3】方丽娟等，江西地区人乳头瘤病毒感染分型检测的研究，实验与检验学 2013 年 4 月第 31 卷第 2 期，181-182。

【4】冯余宽等，四川地区 HPV 亚型及多重感染与宫颈癌前病变的关系初探，四川大学学报（医学版），2015；46（3）；422-425。

【5】刘峰等，云南地区人乳头瘤病毒感染流行病学调查，重庆医科大学学报 2013 年第 38 卷第 9 期，1048-1051。

【6】Kjaer SK, et al. Type specific persistence of high risk human papillomavirus as indicator of high grade cervical squamous intracepithelial lesions in young woman: population based prospective follow up study[J]. BMJ, 2002,13:325(7364)

八、流式荧光技术介绍

流式荧光技术，是基于编码微球和流式技术的一种临床应用型高通量发光检测技术，又称悬浮阵列、液态芯片、液芯以及 xMAP 技术等。该技术有机整合了荧光编码微球、 激光检测、应用流体学、高速数字信号处理技术等多项技术，具有多指标联合检测、通量高、速度快、标本用量少、既能检测蛋白也能检测核酸、既适用于临床检验也适用于科研等多种优点，代表着生命科学基础研究和医学诊断技术的发展方向。流式荧光技术是首个通过美国 FDA 认证的临床应用型高通量诊断技术 。2005 年，获得了全球科技产业和行业研究的权威机构――Frost & Sullivan――授予的“2005 年度国际临床诊断技术革新大奖”。目前该技术已被广泛应用于免疫分析、核酸检测、酶学分析、受体和配体识别分析等研究领域，得到各权威机构和医学界高 度认可。相关的研究论文频频刊登在《自然》、《临床化学》等国际权威学术杂志上。